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双酚A (BPA)对稀有鮈鲫精子发生的影响及分子机制研究

摘要第5-7页
Abstract第7-9页
第一章 文献综述第14-26页
    1.1 BPA简介第14页
    1.2 BPA的污染现状第14-16页
        1.2.1 BPA在水体中污染第15页
        1.2.2 BPA的其他污染情况第15-16页
    1.3 BPA的生殖危害第16-21页
        1.3.1 BPA对人类及其他哺乳动物的生殖危害第16-18页
        1.3.2 BPA对鱼类及其他非哺乳动物的生殖危害第18-21页
    1.4 BPA的作用机制第21-22页
        1.4.1 BPA与雌激素受体及其他受体的相互作用第21页
        1.4.2 通过表观遗传学修饰发挥作用第21-22页
        1.4.3 其他作用机制第22页
    1.5 硬骨鱼类的精子发生第22-24页
        1.5.1 精巢结构第22页
        1.5.2 精巢的生精细胞及非生殖细胞第22-23页
        1.5.3 性激素第23页
        1.5.4 精子形态与运动第23-24页
    1.6 选题目的与意义第24-26页
第二章 BPA对稀有鮈鲫精巢转录组的影响第26-46页
    2.1 材料方法第26-31页
        2.1.1 实验鱼与BPA暴露第26-27页
        2.1.2 样品采集、生物学指标测定、性腺指数(GSI)及组织学检测第27页
        2.1.3 总RNA提取及定量第27页
        2.1.4 cDNA文库的构建、质量检测及高通量测序第27-28页
        2.1.5 RNA-seq数据的生物信息学分析第28-29页
        2.1.6 实时荧光定量PCR(qPCR)验证RNA-Seq数据的可靠性第29-31页
        2.1.7 性激素水平检测第31页
        2.1.8 生物素示踪血睾屏障第31页
        2.1.9 数据分析第31页
    2.2 实验结果第31-42页
        2.2.1 BPA对雄性稀有鮈鲫各项生物学指标、GSI以及组织学影响第31-32页
        2.2.2 总RNA质量检测第32-33页
        2.2.3 转录组数据统计第33页
        2.2.4 BPA处理后差异表达基因(DEG)第33-34页
        2.2.5 qPCR验证结果第34页
        2.2.6 GO富集分析结果第34-36页
        2.2.7 KEGG富集分析结果第36-37页
        2.2.8 基因表达聚类分析结果第37-40页
        2.2.9 基因共表达网络分析结果第40页
        2.2.10 BPA对性激素水平的影响第40-41页
        2.2.11 BPA对精巢血睾屏障的影响第41-42页
    2.3 讨论第42-45页
        2.3.1 不同浓度BPA对稀有鮈鲫精巢转录影响的共性第42-44页
        2.3.2 不同浓度BPA对稀有鮈鲫精巢转录影响的特性第44-45页
    2.4 小结第45-46页
第三章 BPA对稀有鮈鲫精巢性激素合成基因表达的影响及机制第46-67页
    3.1 材料方法第47-51页
        3.1.1 启动子、cDNA克隆及序列分析第47页
        3.1.2 实验鱼与BPA暴露第47-48页
        3.1.3 样品采集、生物学指标、GSI以及精巢组织切片第48-49页
        3.1.4 总RNA提取和反转录第49页
        3.1.5 内参筛选与qPCR第49页
        3.1.6 数据分析第49-51页
    3.2 实验结果第51-64页
        3.2.1 性激素合成相关基因启动子克隆分析结果第51-57页
        3.2.2 nr5as全长cDNA的克隆及序列分析第57-59页
        3.2.3 nr5as在稀有鮈鲫各个组织的分布第59页
        3.2.4 BPA对稀有鮈鲫生物学指标、GSI以及精巢组织学的影响第59-60页
        3.2.5 BPA对稀有鮈鲫精巢vtg基因的影响第60-61页
        3.2.6 BPA对精巢性激素合成相关基因及性激素受体基因表达影响第61-64页
        3.2.7 精巢表达基因的相关性第64页
    3.3 讨论第64-66页
    3.4 小结第66-67页
第四章 BPA诱导稀有鮈鲫精母细胞凋亡及机制第67-77页
    4.1 材料方法第67-69页
        4.1.1 实验动物及BPA暴露第67页
        4.1.2 样品采集、生物学指标以及性腺指数第67-68页
        4.1.3 组织切片和凋亡TUNEL染色第68页
        4.1.4 透射电镜(TEM)第68页
        4.1.5 总RNA提取、反转录及qPCR第68页
        4.1.6 蛋白质免疫印记(WB)第68页
        4.1.7 数据分析第68-69页
    4.2 实验结果第69-74页
        4.2.1 BPA对稀有鮈鲫生物学指标、GSI以及精巢组织学的影响第69页
        4.2.2 TUNEL检测精巢凋亡结果第69-71页
        4.2.3 精巢生殖细胞凋亡超微结构的观察第71-72页
        4.2.4 BPA对bcl2/bax基因以及Bcl2/Bax蛋白的比值的影响第72页
        4.2.5 BPA对凋亡相关基因表达的影响第72-73页
        4.2.6 BPA对细胞周期相关基因表达的影响第73-74页
    4.3 讨论第74-76页
    4.4 小结第76-77页
第五章 BPA对稀有鮈鲫精子功能的影响及分子机制第77-94页
    5.1 材料方法第77-81页
        5.1.1 实验动物及BPA暴露第77页
        5.1.2 样品采集、生物学指标以及性腺指数第77-78页
        5.1.3 血清性激素水平检测第78页
        5.1.4 精子密度、活力以及受精能力的检测第78页
        5.1.5 透射电镜与透射电镜第78-79页
        5.1.6 流式细胞第79页
        5.1.7 总RNA提取、反转录及qPCR第79页
        5.1.8 WB第79页
        5.1.9 免疫组化(IHC)第79-80页
        5.1.10 染色质免疫共沉淀(ChIP)第80-81页
        5.1.11 数据分析第81页
    5.2 实验结果第81-91页
        5.2.1 BPA对稀有鮈鲫生物学指标、GSI以及精巢组织学的影响第81页
        5.2.2 BPA对血清性激素水平的影响第81-82页
        5.2.3 BPA对精子密度、活力以及受精能力的影响第82-83页
        5.2.4 BPA对精子超微结构的影响第83-85页
        5.2.5 BPA对精子渗透压适应能力的影响第85-87页
        5.2.6 aqps基因的组织分布第87页
        5.2.7 BPA对aqps mRNA及蛋白表达的影响第87-88页
        5.2.8 Aqps蛋白在精巢中的定位以及其在BPA处理下的表达变化第88-90页
        5.2.9 aqps 5’侧翼序列ERE验证以及BPA对其Esr募集的影响第90-91页
    5.3 讨论第91-93页
    5.4 小结第93-94页
第六章 稀有鮈鲫精巢vtg对BPA的应答机制第94-104页
    6.1 材料方法第94-96页
        6.1.1 实验动物及BPA暴露第94页
        6.1.2 样品采集、生物学指标以及性腺指数第94-95页
        6.1.3 总RNA提取、反转录及qPCR第95页
        6.1.4 WB第95页
        6.1.5 免疫组化第95页
        6.1.6 ChIP第95-96页
        6.1.7 蛋白质免疫共沉淀(CoIP)第96页
        6.1.8 血清E2水平检测第96页
        6.1.9 数据分析第96页
    6.2 实验结果第96-102页
        6.2.1 BPA对稀有鮈鲫生物学指标、GSI以及精巢组织学的影响第96页
        6.2.2 vtg mRNA的编码信息及组织分布第96-97页
        6.2.3 精巢Vtg蛋白带型以及分布第97-98页
        6.2.4 BPA对精巢vtg基因表达的影响第98-99页
        6.2.5 Esr在vtg1基因启动子区募集第99页
        6.2.6 BPA对Esr、Hsp90以及Esr-Hsp90复合体的影响第99-100页
        6.2.7 BPA对血清E2水平的影响第100-101页
        6.2.8 BPA对精巢Vtg蛋白水平的影响第101-102页
    6.3 讨论第102-103页
    6.4 小结第103-104页
结论及创新点第104-105页
参考文献第105-125页
缩略词第125-129页
附录第129-136页
致谢第136-137页
作者简介第137-139页

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