| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 食用菌病毒的研究概括 | 第14-19页 |
| 1.1 食用菌病毒形态和种类 | 第15页 |
| 1.2 食用菌病毒基因组和蛋白特征 | 第15-19页 |
| 1.2.1 糙皮侧耳病毒(Pleurotus ostreatus virus) | 第16页 |
| 1.2.2 双孢蘑菇病毒(Agaricus bisporus virus) | 第16-17页 |
| 1.2.3 香菇病毒(Lentinus edodes virus) | 第17页 |
| 1.2.4 金针菇病毒(Flammulina velutipes virus) | 第17-18页 |
| 1.2.5 其他食用菌病毒 | 第18-19页 |
| 2 病毒的起源、复制及传播途径 | 第19-21页 |
| 2.1 病毒的起源和复制 | 第19-20页 |
| 2.2 病毒的传播途径 | 第20-21页 |
| 3 病毒检测方法 | 第21-23页 |
| 3.1 电镜法 | 第21页 |
| 3.2 酶联免疫吸附法 | 第21页 |
| 3.3 dsRNA技术 | 第21-22页 |
| 3.4 RT-PCR法 | 第22页 |
| 3.5 生物芯片技术 | 第22-23页 |
| 4 食用菌脱毒方法的研究 | 第23-25页 |
| 4.1 菌丝尖端分离法 | 第23-24页 |
| 4.2 组织分离法 | 第24页 |
| 4.3 原生质体法 | 第24页 |
| 4.4 单孢杂交法 | 第24-25页 |
| 5 研究目的和内容 | 第25-26页 |
| 第二章 金针菇菌株病毒检测和鉴定 | 第26-46页 |
| 1 试验材料 | 第26-29页 |
| 1.1 供试菌株 | 第26-27页 |
| 1.2 试剂 | 第27-28页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第28-29页 |
| 2 试验方法 | 第29-35页 |
| 2.1 培养基和试剂的配置 | 第29页 |
| 2.1.1 培养基 | 第29页 |
| 2.1.2 试剂 | 第29页 |
| 2.2 培养和收集菌丝 | 第29-30页 |
| 2.3 提取病毒dsRNA、酶处理和纯化 | 第30-32页 |
| 2.3.1 菌丝预处理 | 第30页 |
| 2.3.2 病毒dsRNA提取 | 第30-31页 |
| 2.3.3 DNase Ⅰ和S1 Nuclease酶处理 | 第31页 |
| 2.3.4 酶处理产物的纯化 | 第31-32页 |
| 2.4 透射电子显微镜观察 | 第32页 |
| 2.5 RT-PCR鉴定、克隆测序和序列比对 | 第32-35页 |
| 2.5.1 设计引物 | 第32-33页 |
| 2.5.2 RT-PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 2.5.3 克隆测序和序列比对 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-43页 |
| 3.1 菌丝培养 | 第35-36页 |
| 3.2 病毒dsRNA检测 | 第36页 |
| 3.3 DNase Ⅰ和S1 Nuclease酶处理 | 第36-37页 |
| 3.4 透射电镜观察 | 第37页 |
| 3.5 RT-PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 3.6 RT-PCR片段回收 | 第38页 |
| 3.7 克隆、测序和序列比对 | 第38-43页 |
| 3.7.1 菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 3.7.2 测序结果 | 第39-40页 |
| 3.7.3 序列比对 | 第40-42页 |
| 3.7.4 本地Blast | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43页 |
| 5 小结 | 第43-46页 |
| 第三章 病毒dsRNA快速检测方法和体系的建立 | 第46-54页 |
| 1 实验材料 | 第46页 |
| 1.1 供试菌株 | 第46页 |
| 1.2 试剂 | 第46页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-48页 |
| 2.1 培养基的配置 | 第46-47页 |
| 2.2 两种dsRNA提取方法 | 第47页 |
| 2.3 DNase Ⅰ和S1 Nuclease酶处理和纯化 | 第47页 |
| 2.4 RT-PCR鉴定、克隆测序和序列比对 | 第47页 |
| 2.5 两种提取dsRNA方法的比较 | 第47页 |
| 2.6 dsRNA提取方法的优化 | 第47-48页 |
| 2.6.1 培养基、培养方式和培养时间 | 第47-48页 |
| 2.6.2 生长发育阶段 | 第48页 |
| 2.6.3 菌丝量 | 第48页 |
| 2.6.4 β-巯基乙醇浓度 | 第48页 |
| 2.6.5 PEG8000处理时间 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 3.1 供试菌株dsRNA检测 | 第48-49页 |
| 3.2 dsRNA酶处理 | 第49页 |
| 3.3 RT-PCR鉴定 | 第49页 |
| 3.4 序列比对 | 第49-50页 |
| 3.5 Redzol法和试剂盒法的比较 | 第50页 |
| 3.6 dsRNA提取方法优化结果 | 第50-52页 |
| 3.6.1 培养基、培养方式和时间 | 第50-51页 |
| 3.6.2 生长发育阶段 | 第51页 |
| 3.6.3 菌丝量 | 第51页 |
| 3.6.4 β-巯基乙醇 | 第51-52页 |
| 3.6.5 PEG8000处理时间 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 5 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 金针菇褐化病毒(FvBV)脱毒方法的研究 | 第54-72页 |
| 1 实验材料 | 第54-55页 |
| 1.1 供试菌株 | 第54-55页 |
| 1.2 试剂 | 第55页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-60页 |
| 2.1 培养基的配置 | 第55-56页 |
| 2.2 菌丝尖端分离法 | 第56页 |
| 2.2.1 菌丝尖端分离菌株 | 第56页 |
| 2.2.2 dsRNA检测 | 第56页 |
| 2.3 组织分离法 | 第56-57页 |
| 2.3.1 组织分离菌株 | 第56-57页 |
| 2.3.2 dsRNA检测 | 第57页 |
| 2.4 原生质体法 | 第57-58页 |
| 2.4.1 原生质体再生和单核菌株 | 第57-58页 |
| 2.4.2 dsRNA检测 | 第58页 |
| 2.4.3 PM菌株交配型鉴定 | 第58页 |
| 2.5 有性生殖法 | 第58-59页 |
| 2.5.1 建立孢子单核体群体 | 第58-59页 |
| 2.5.2 孢子单核菌株dsRNA检测 | 第59页 |
| 2.6 核迁移法 | 第59-60页 |
| 2.6.1 核迁移和核迁移双核菌株的获得 | 第59页 |
| 2.6.2 核迁移法脱毒应用 | 第59页 |
| 2.6.3 核迁移双核菌株dsRNA检测 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-69页 |
| 3.1 菌丝尖端分离法 | 第60页 |
| 3.1.1 尖端菌丝形态 | 第60页 |
| 3.1.2 TIPS菌株dsRNA检测 | 第60页 |
| 3.2 组织分离法 | 第60-62页 |
| 3.2.1 取样材料 | 第60-61页 |
| 3.2.2 组织分离菌株dsRNA检测 | 第61-62页 |
| 3.3 原生质体法 | 第62-64页 |
| 3.3.1 原生质体制备与再生 | 第62页 |
| 3.3.2 PR菌株dsRNA检测 | 第62-63页 |
| 3.3.3 PM菌株交配型鉴定 | 第63页 |
| 3.3.4 PM菌株dsRNA检测 | 第63-64页 |
| 3.4 有性生殖法 | 第64-65页 |
| 3.4.1 孢子印和孢子萌发菌落 | 第64页 |
| 3.4.2 SM菌株dsRNA检测 | 第64-65页 |
| 3.5 核迁移法 | 第65-66页 |
| 3.5.1 核迁移和双核菌株的获得 | 第65页 |
| 3.5.2 NM菌株dsRNA检测 | 第65-66页 |
| 3.6 核迁移法脱毒应用 | 第66-68页 |
| 3.6.1 单-单核迁移和双核菌株的获得 | 第66页 |
| 3.6.2 单-单核迁移双核菌株dsRNA检测 | 第66-67页 |
| 3.6.3 双-单核迁移和双核菌株的获得 | 第67页 |
| 3.6.4 双-单核迁移双核菌株dsRNA检测 | 第67-68页 |
| 3.7 RT-PCR鉴定 | 第68-69页 |
| 3.8 不同脱毒方法的比较 | 第69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 5 小结 | 第70-72页 |
| 第五章 不同脱毒处理菌株的生物学和栽培特性 | 第72-88页 |
| 1 材料 | 第72页 |
| 1.1 供试菌株 | 第72页 |
| 1.2 试剂 | 第72页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第72页 |
| 2 实验方法 | 第72-75页 |
| 2.1 培养基的配置 | 第72-73页 |
| 2.2 菌丝生长速度的测定 | 第73页 |
| 2.2.1 PDA平板 | 第73页 |
| 2.2.2 培养料 | 第73页 |
| 2.3 生物量的测定 | 第73页 |
| 2.4 漆酶活力的测定 | 第73-74页 |
| 2.5 工厂化栽培实验 | 第74-75页 |
| 2.5.1 制备液体种 | 第74页 |
| 2.5.2 工厂化栽培相关参数 | 第74页 |
| 2.5.3 测定栽培性状方法 | 第74-75页 |
| 2.5.4 数据处理与分析 | 第75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-86页 |
| 3.1 不同脱毒处理菌株的生物学特性 | 第75-78页 |
| 3.1.1 菌丝生长速度 | 第75-76页 |
| 3.1.2 生物量 | 第76-77页 |
| 3.1.3 漆酶活力 | 第77-78页 |
| 3.2 不同脱毒处理菌株的栽培特性 | 第78-82页 |
| 3.2.1 栽培流程 | 第78页 |
| 3.2.2 统计分析各栽培性状 | 第78-82页 |
| 3.3 核迁移菌株无毒优良株系的选育 | 第82-86页 |
| 3.3.1 菌丝生长速度的比较 | 第82-83页 |
| 3.3.2 产量的比较 | 第83-85页 |
| 3.3.3 选育无毒优良株系 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86页 |
| 5 小结 | 第86-88页 |
| 第六章 全文总结 | 第88-90页 |
| 展望 | 第90-92页 |
| 附录 | 第92-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 攻读攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第104页 |
