| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 上篇 文献综述 | 第17-45页 |
| 第一章 猪流感及猪流感病毒研究进展 | 第17-27页 |
| 1 猪流感 | 第17-18页 |
| 1.1 猪流感的历史和现状 | 第17-18页 |
| 1.2 猪流感的流行病学特征及症状 | 第18页 |
| 1.3 猪流感的危害 | 第18页 |
| 2 猪流感病毒 | 第18-22页 |
| 2.1 猪流感病毒基因组片段、蛋白表达及功能 | 第19-21页 |
| 2.2 猪流感病毒的复制、进化及变异 | 第21页 |
| 2.3 H3N2猪流感病毒 | 第21-22页 |
| 3 宿主对猪流感病毒的免疫反应 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-27页 |
| 第二章 宿主抗病毒天然免疫研究进展 | 第27-37页 |
| 1 TLRs及其介导的抗病毒天然免疫途径 | 第27-30页 |
| 1.1 TLRs结构和功能 | 第27-29页 |
| 1.2 TLRs介导的信号通路 | 第29-30页 |
| 1.3 TLRs介导的抗病毒天然免疫 | 第30页 |
| 2 RLRs及其介导的抗病毒天然免疫途径 | 第30-32页 |
| 2.1 RLRs的结构及配体识别 | 第31页 |
| 2.2 RLRs介导的抗病毒信号通路 | 第31-32页 |
| 3 TLRs和RLRs介导的信号通路的联系 | 第32-34页 |
| 参考文献 | 第34-37页 |
| 第三章 线粒体蛋白MAVS介导的抗病毒信号通路 | 第37-45页 |
| 1 MAVS蛋白 | 第37-38页 |
| 2 MAVS介导的细胞因子产生途径 | 第38-39页 |
| 3 MAVS和细胞凋亡 | 第39-41页 |
| 3.1 细胞凋亡 | 第39页 |
| 3.2 线粒体与细胞凋亡 | 第39-40页 |
| 3.3 MAVS分子与细胞凋亡 | 第40-41页 |
| 4 病毒拮抗MAVS介导的信号通路 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 下篇 研究内容 | 第45-115页 |
| 第四章 猪流感病毒感染对猪肺泡巨噬细胞天然免疫信号通路的影响 | 第45-59页 |
| 1 材料与方法 | 第46-50页 |
| 1.1 病毒、细胞与试验动物 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂与材料 | 第46页 |
| 1.3 主要仪器 | 第46-47页 |
| 1.4 猪肺泡巨噬细胞的分离培养 | 第47页 |
| 1.5 猪流感病毒感染猪肺泡巨噬细胞 | 第47页 |
| 1.6 细胞总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 1.7 实时荧光定量RT-PCR | 第48-50页 |
| 1.8 间接免疫荧光 | 第50页 |
| 1.9 细胞因子检测 | 第50页 |
| 1.10 统计分析 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-53页 |
| 2.1 猪流感病毒感染猪肺泡巨噬细胞的间接免疫荧光观察 | 第50-51页 |
| 2.2 TLR及RLR信号通路中相关受体的mRNA变化 | 第51页 |
| 2.3 TLR及RLR信号通路中关键接头蛋白的mRNA变化 | 第51-52页 |
| 2.4 细胞因子的mRNA变化 | 第52-53页 |
| 2.5 细胞因子的含量变化 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 第五章 猪流感病毒感染对上皮细胞A549天然免疫信号通路的影响 | 第59-75页 |
| 1 材料与方法 | 第60-66页 |
| 1.1 病毒、细胞与质粒 | 第60页 |
| 1.2 主要试剂 | 第60-61页 |
| 1.3 主要仪器 | 第61页 |
| 1.4 猪流感病毒感染A549细胞 | 第61页 |
| 1.5 毒价测定(TCID_(50)) | 第61页 |
| 1.6 病毒生长曲线的绘制 | 第61-62页 |
| 1.7 间接免疫荧光 | 第62页 |
| 1.8 细胞总RNA的提取 | 第62页 |
| 1.9 实时定量RT-PCR | 第62-64页 |
| 1.10 蛋白电泳及免疫印迹 | 第64-66页 |
| 1.11 统计分析 | 第66页 |
| 2 结果 | 第66-69页 |
| 2.1 猪流感病毒在A549细胞上的增殖 | 第66页 |
| 2.2 猪流感病毒感染A549细胞的间接免疫荧光观察 | 第66-67页 |
| 2.3 TLR及RLR信号通路中相关受体或效应分子的mRNA变化 | 第67-68页 |
| 2.4 A549细胞感染SIV后TLR及RLR信号通路中相关受体或蛋白的表达 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 第六章 MAVS通过介导IFN-I的产生抑制猪流感病毒的增殖 | 第75-89页 |
| 1 材料与方法 | 第76-79页 |
| 1.1 病毒、细胞与质粒 | 第76页 |
| 1.2 主要试剂 | 第76-77页 |
| 1.3 主要仪器 | 第77页 |
| 1.4 siRNA合成 | 第77页 |
| 1.5 载体的构建 | 第77-78页 |
| 1.6 过表达试验 | 第78页 |
| 1.7 siRNA转染 | 第78页 |
| 1.8 毒价测定(TCID_(50)) | 第78-79页 |
| 1.9 统计分析 | 第79页 |
| 2 结果 | 第79-82页 |
| 2.1 过表达MAVS对IFN-β启动子的影响 | 第79-80页 |
| 2.2 不同MAVS表达载体对IFN-β启动子、NF-κB及IRF-3结合位点活性的影响 | 第80页 |
| 2.3 过表达MAVS全长及截短突变体对病毒增殖的影响 | 第80-81页 |
| 2.4 MAVS对IFN-β启动子活化的影响 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 第七章 MAVS介导病毒引起的细胞凋亡 | 第89-103页 |
| 1 材料与方法 | 第90-94页 |
| 1.1 病毒、细胞与质粒 | 第90页 |
| 1.2 主要试剂 | 第90页 |
| 1.3 主要仪器 | 第90-91页 |
| 1.4 siRNA合成 | 第91页 |
| 1.5 过表达试验 | 第91页 |
| 1.6 siRNA转染 | 第91-92页 |
| 1.7 电镜观察 | 第92页 |
| 1.8 蛋白电泳及免疫印迹 | 第92-93页 |
| 1.9 Transwell试验 | 第93-94页 |
| 1.10 统计分析 | 第94页 |
| 2 结果 | 第94-98页 |
| 2.1 过表达MAVS能够产生凋亡 | 第94-95页 |
| 2.2 电镜观察凋亡细胞的形态 | 第95-96页 |
| 2.3 RNAi抑制MAVS表达能抑制凋亡的发生 | 第96-97页 |
| 2.4 不同截短突变体对凋亡的影响 | 第97页 |
| 2.5 MAVS介导的凋亡与其诱导Ⅰ型干扰素产生的关系 | 第97-98页 |
| 3 讨论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-103页 |
| 第八章 猪流感病毒相关蛋白对MAVS介导的IFN-Ⅰ产生及凋亡的影响 | 第103-115页 |
| 1 材料与方法 | 第104-106页 |
| 1.1 病毒、细胞与质粒 | 第104页 |
| 1.2 主要试剂 | 第104-105页 |
| 1.3 主要仪器 | 第105页 |
| 1.4 共转染试验 | 第105页 |
| 1.5 双荧光素酶报告实验 | 第105页 |
| 1.6 毒价测定(TCID_(50)) | 第105-106页 |
| 1.7 统计分析 | 第106页 |
| 2 结果 | 第106-108页 |
| 2.1 NS1、PB1-F2及NP对MAVS介导的IFN的影响 | 第106页 |
| 2.2 NS1、PB1-F2及NP对MAVS介导的凋亡的影响 | 第106-107页 |
| 2.3 NS1对凋亡的抑制呈剂量依赖性 | 第107-108页 |
| 2.4 NS1、PB1-F2、NP与MAVS共表达对病毒增殖的影响 | 第108页 |
| 3 讨论 | 第108-111页 |
| 参考文献 | 第111-115页 |
| 全文总结 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第119页 |
