| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第7-11页 |
| 综述 | 第11-21页 |
| 1 猪传染性胸膜肺炎概述 | 第11-12页 |
| 2 胸膜肺炎放线杆菌致病机理 | 第12-14页 |
| 3 细菌多胺及其代谢 | 第14-15页 |
| 3.1 多胺合成 | 第14-15页 |
| 3.2 多胺分解 | 第15页 |
| 4 多胺与细菌致病性研究 | 第15-17页 |
| 4.1 参与毒力蛋白的表达 | 第16页 |
| 4.2 增强细菌逃避机体免疫 | 第16页 |
| 4.3 影响细菌抗氧化胁迫和酸化胁迫 | 第16-17页 |
| 4.4 影响生物膜的形成 | 第17页 |
| 5 多胺转运蛋白PotD研究进展 | 第17-21页 |
| 5.1 多胺转运系统 | 第18页 |
| 5.2 多胺(亚精胺)结合蛋白PotD的研究 | 第18-20页 |
| 5.2.1 大肠杆菌上研究进展 | 第18-19页 |
| 5.2.2 肺炎双球菌中的研究进展 | 第19页 |
| 5.2.3 蓝细菌中的研究进展 | 第19-20页 |
| 5.2.4 其他细菌中的研究进展 | 第20页 |
| 5.3 胸膜肺炎放线杆菌研究进展 | 第20-21页 |
| 研究目的意义 | 第21-22页 |
| 第一章 APP potD2基因缺失株及其互补株构建与鉴定 | 第22-49页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1 实验菌株与质粒 | 第22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.3 培养基配置 | 第22-23页 |
| 1.4 主要仪器 | 第23页 |
| 1.5 引物设计 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-37页 |
| 2.1 胸膜肺炎放线杆菌基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2 potD2左右同源臂的扩增及融合 | 第25-26页 |
| 2.3 重组自杀性转移质粒pEMOC2-△potD2的构建 | 第26-28页 |
| 2.4 MS△potD2缺失株的构建 | 第28-31页 |
| 2.4.1 pEMOC2-△potD2质粒的小量提取 | 第29页 |
| 2.4.2 β2155大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第29-30页 |
| 2.4.3 结合转移 | 第30页 |
| 2.4.4 正向筛选一次交换重组子及PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.5 负向筛选MS△potD2及PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.5 C△potD2互补株的构建 | 第31-34页 |
| 2.5.1 potD2基因表达框架的扩增 | 第31-32页 |
| 2.5.2 pLS88-potD2互补质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.5.3 APP MS△potD2电转化感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.5.4 互补质粒pLS88-potD2的电转化 | 第33-34页 |
| 2.5.5 互补株C△potD2的PCR鉴定 | 第34页 |
| 2.6 potD2免疫印迹检测 | 第34-37页 |
| 2.6.1 原核表达载体pET32a-potD2的构建 | 第34-35页 |
| 2.6.2 PotD2蛋白的体外诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.6.3 重组蛋白的分离纯化 | 第36页 |
| 2.6.4 PotD2蛋白抗血清的制备 | 第36页 |
| 2.6.5 突变株免疫印迹鉴定分析 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-45页 |
| 3.1 potD2基因左右同源臂的扩增及融合 | 第37-38页 |
| 3.2 重组自杀性质粒的PCR、酶切及测序鉴定 | 第38页 |
| 3.3 缺失株的筛选与鉴定 | 第38-40页 |
| 3.3.1 正向筛选鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.2 负向筛选鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4 互补穿梭质粒的鉴定分析 | 第40-41页 |
| 3.5 互补株筛选鉴定 | 第41-42页 |
| 3.6 western blot鉴定 | 第42-45页 |
| 3.6.1 重组表达质粒酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3.6.2 重组蛋白PotD2的可溶性表达与纯化结果 | 第43-45页 |
| 3.6.3 缺失株及互补株免疫印迹鉴定结果 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 关于缺失株的构建 | 第45-47页 |
| 4.2 关于互补株的构建 | 第47-48页 |
| 5. 小结 | 第48-49页 |
| 第二章 MS△potD2缺失株及其互补株的生物学特性研究 | 第49-63页 |
| 1 材料 | 第49页 |
| 1.1 菌株 | 第49页 |
| 1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 1.3 实验仪器与耗材 | 第49页 |
| 1.4 实验动物 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-52页 |
| 2.1 遗传稳定性试验 | 第49-50页 |
| 2.2 生长实验 | 第50页 |
| 2.3 溶血性实验 | 第50页 |
| 2.4 影响生物膜生成实 | 第50-51页 |
| 2.5 压力耐受性实验 | 第51页 |
| 2.6 小鼠致病性实验 | 第51-52页 |
| 2.6.1 活菌平板计数 | 第51页 |
| 2.6.2 LD_(100)和LD_0测定 | 第51-52页 |
| 2.6.3 半数致死量的测定 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-59页 |
| 3.1 遗传稳定实验 | 第52-54页 |
| 3.2 生长曲线的测定 | 第54页 |
| 3.3 溶血活性结果 | 第54-55页 |
| 3.4 生物膜实验 | 第55-56页 |
| 3.5 压力耐受 | 第56-58页 |
| 3.5.1 高渗透压耐受 | 第56页 |
| 3.5.2 热激实验 | 第56-57页 |
| 3.5.3 氧化耐受 | 第57-58页 |
| 3.6 LD_(50)的测定 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 关于生长特性 | 第59页 |
| 4.2 关于生物膜的形成 | 第59-60页 |
| 4.3 关于抗环境压力胁迫 | 第60-62页 |
| 5 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
