| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 部分缩写及符号说明 | 第6-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1.1 型鸭甲肝病毒的简介 | 第10-11页 |
| 1.1.1 DHAV-1的理化和生物学特性 | 第10页 |
| 1.1.2 DHAV的分子结构 | 第10-11页 |
| 1.1.3 常见病毒蛋白质的翻译机制 | 第11页 |
| 1.2 IRES的研究概况 | 第11-16页 |
| 1.2.1 IRES的发现及分类 | 第12页 |
| 1.2.2 IRES的二级结构 | 第12-13页 |
| 1.2.3 参与IRES翻译起始的调控因素 | 第13-14页 |
| 1.2.4 IRES的应用及活性 | 第14-15页 |
| 1.2.5 IRES在基因治疗中充当靶位点的作用 | 第15-16页 |
| 1.3 脱氧核酶的研究概况 | 第16-17页 |
| 1.3.1 脱氧核酶的发现 | 第16页 |
| 1.3.2 脱氧核酶的特性 | 第16-17页 |
| 1.3.3 脱氧核酶的应用 | 第17页 |
| 1.4 选题目的及意义 | 第17页 |
| 2 试验研究 | 第17-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 毒株和菌种 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 其他试验材料 | 第18页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.3 试验方法 | 第19-33页 |
| 2.3.1 DNAzymes对DHAV-RNA的体外切割试验 | 第19-25页 |
| 2.3.2 含IRES结构元件的重组载体pEGFP-Red-IRES-N1构建 | 第25-29页 |
| 2.3.3 在DEF中DNAzymes对IRES活性的抑制作用 | 第29-31页 |
| 2.3.4 DZ454对DHAV-1全病毒复制的抑制作用 | 第31-33页 |
| 3 试验结果 | 第33-47页 |
| 3.1 DHAV-1 IRES的二级结构预测 | 第33页 |
| 3.2 含有IRES结构元件目的基因的T克隆及体外转录 | 第33-35页 |
| 3.2.1 目的基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 3.2.2 含有IRES结构元件目的基因的T克隆 | 第34页 |
| 3.2.3 DHAV-RNA体外转录物完整性的检测 | 第34-35页 |
| 3.3 DNAzymes对IRES的体外切割试验 | 第35-36页 |
| 3.3.1 在Mg~(2+)参与下各种DNAzymes对IRES的切割作用 | 第35页 |
| 3.3.2 在不同金属离子的参与下DNAzymes对IRES的切割作用 | 第35-36页 |
| 3.4 重组质粒pEGFP-Red-IRES-N1的构建及表达 | 第36-40页 |
| 3.4.1 含有IRES结构元件目的基因和Red基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| 3.4.2 含有IRES结构元件目的基因和Red基因的T克隆 | 第37-38页 |
| 3.4.3 含有IRES结构元件目的基因和Red基因的亚克隆 | 第38-39页 |
| 3.4.4 重组质粒的表达 | 第39-40页 |
| 3.5 在DEF中DNAzymes对IRES的抑制作用 | 第40-45页 |
| 3.5.1 DNAzymes对细胞毒性的评估 | 第40-41页 |
| 3.5.2 量效关系 | 第41-43页 |
| 3.5.3 时效关系 | 第43-44页 |
| 3.5.4 最适侧翼长度 | 第44-45页 |
| 3.6 DZ454对DHAV-1复制的抑制作用 | 第45-47页 |
| 3.6.1 TCID_(50)的测定 | 第45页 |
| 3.6.2 标准曲线的构建 | 第45-46页 |
| 3.6.3 样品的定量检测 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
