| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-32页 |
| ·四氢生物蝶呤的生理作用及意义 | 第11页 |
| ·BH4的合成代谢途径 | 第11-16页 |
| ·依赖BH4的酶及其催化的反应 | 第16-21页 |
| ·BH4合成的调控及体内平衡 | 第21-23页 |
| ·BH4病理学 | 第23-27页 |
| ·BH4缺陷的动物模型 | 第27-28页 |
| ·昆虫中BH4的相关研究 | 第28-29页 |
| ·家蚕中BH4的相关研究 | 第29-32页 |
| 第二章 家蚕四氢生物蝶呤重生途径的研究 | 第32-57页 |
| 1. 引言 | 第32页 |
| 2. 实验材料 | 第32-37页 |
| ·家蚕品系 | 第32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·主要生化试剂 | 第33页 |
| ·常用溶液的配制 | 第33-36页 |
| ·本实验所用引物 | 第36-37页 |
| 3. 实验方法 | 第37-44页 |
| ·总RNA的提取 | 第37页 |
| ·反转录 | 第37-38页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第38页 |
| ·半定量PCR | 第38-39页 |
| ·BmPcd和BmDhpr基因的克隆 | 第39页 |
| ·BmPCD和BmDHPR的表达与纯化 | 第39-42页 |
| ·BmDHPR重组蛋白的免疫印迹 | 第42页 |
| ·家蚕组织粗蛋白的提取 | 第42-43页 |
| ·重组BmDHPR蛋白和粗蛋白中DHPR酶活性的测定 | 第43-44页 |
| 4. 结果与分析 | 第44-54页 |
| ·BH4从头合成途径和补救合成途径相关基因的表达谱分析 | 第44页 |
| ·重生途径中相关基因的表达谱分析 | 第44-46页 |
| ·BmPcd和BmDhpr的序列分析 | 第46-48页 |
| ·BmPCD和BmDHPR的诱导表达与纯化 | 第48-52页 |
| ·家蚕总蛋白和重组BmDHPR蛋白的活性分析 | 第52-54页 |
| 5. 讨论 | 第54-55页 |
| ·lem、lem~l和al突变对BH4相关基因表达的影响 | 第54-55页 |
| ·家蚕体内蝶啶类化合物的运输 | 第55页 |
| 6. 结论 | 第55-57页 |
| 第三章 家蚕BH4合成相关基因的表达干涉与调控研究 | 第57-79页 |
| 1. 引言 | 第57页 |
| 2. 实验材料 | 第57-60页 |
| ·家蚕品系与细胞系 | 第57-58页 |
| ·主要实验仪器 | 第58页 |
| ·主要生化试剂、耗材 | 第58页 |
| ·常用溶液的配制 | 第58-59页 |
| ·本实验所用引物 | 第59-60页 |
| 3. 实验方法 | 第60-66页 |
| ·shRNA的设计 | 第60-61页 |
| ·shRNA干涉载体的构建 | 第61-62页 |
| ·shRNA干涉载体的细胞转染 | 第62-63页 |
| ·RNA干涉效果及BH4相关基因的表达分析 | 第63-64页 |
| ·干涉质粒的大量抽提 | 第64-65页 |
| ·干涉质粒转基因显微注射 | 第65页 |
| ·双荧光素酶载体的构建 | 第65-66页 |
| 4. 结果与分析 | 第66-76页 |
| ·干涉靶基因氨基酸序列的二级结构预测 | 第66-67页 |
| ·shRNA的设计与筛选 | 第67-69页 |
| ·shRNA干涉载体的构建 | 第69-70页 |
| ·转染BmN细胞 | 第70-73页 |
| ·shRNA的干涉效果与筛选 | 第73页 |
| ·靶标基因的表达干涉对其他基因的影响 | 第73-74页 |
| ·BmDhpr荧光素酶载体的构建 | 第74-75页 |
| ·shRNA介导的家蚕转基因干涉研究 | 第75-76页 |
| 5. 讨论 | 第76-78页 |
| ·影响BmN细胞转染效果的因素 | 第76页 |
| ·靶标基因的表达干涉对其他基因影响的原因 | 第76-77页 |
| ·体外快速合成BH4的可能方法 | 第77-78页 |
| 6. 结论 | 第78-79页 |
| 第四章 BmAR和BmCR的全基因组筛选与分析 | 第79-96页 |
| 1. 引言 | 第79页 |
| 2. 实验材料 | 第79-82页 |
| ·家蚕品系 | 第79页 |
| ·主要实验仪器 | 第79-80页 |
| ·主要生化试剂 | 第80页 |
| ·常用溶液配制 | 第80页 |
| ·本实验所用引物 | 第80-82页 |
| 3. 实验方法 | 第82-83页 |
| ·基因组及cDNA文库数据库检索 | 第82页 |
| ·进化树分析 | 第82页 |
| ·转录水平差异分析 | 第82-83页 |
| 4. 结果与分析 | 第83-94页 |
| ·BmAr与BmCr基因的数据库检索与克隆 | 第83-90页 |
| ·BmAR和BmCR的进化分析 | 第90-92页 |
| ·BmAr和BmCr在p50和ah09中的表达差异分析 | 第92-94页 |
| 5. 讨论 | 第94-95页 |
| ·与BH4合成相关的BmAR和BmCR的预测 | 第94-95页 |
| ·家蚕BH4选择性合成支路 | 第95页 |
| 6. 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 作者简介 | 第119页 |
