| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-16页 |
| 1 MicroRNA的研究现状 | 第11-14页 |
| ·MicroRNA简介 | 第11页 |
| ·MicroRNA与人类疾病 | 第11-12页 |
| ·MicroRNA靶基因的预测及筛选 | 第12-13页 |
| ·MicroRNA调控蛋白的研究现状 | 第13-14页 |
| ·家蚕microRNA | 第14页 |
| 2 Notch信号途径及E(spl)m4蛋白 | 第14-15页 |
| ·Notch信号途径简介 | 第14页 |
| ·E(spl)m4蛋白 | 第14-15页 |
| 3 展望 | 第15-16页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第16-19页 |
| 1 研究目的与意义 | 第16页 |
| 2 实验内容 | 第16-18页 |
| 3 实验流程图 | 第18-19页 |
| ·Bmo-miR-79靶位点的双荧光素酶验证、细胞中上调bmo-miR-79对BmEm4蛋白表达影响及BmAGO2与bmo-miR-79互作分析 | 第18页 |
| ·家蚕不同发育时期bmo-miR-79与BmEm4基因的表达谱分析 | 第18-19页 |
| 第三章 双荧光素酶报告基因法验证BmEm4的bmo-miR-79靶位点 | 第19-34页 |
| 1 材料、试剂及仪器 | 第19-21页 |
| ·主要材料与试剂 | 第19页 |
| ·引物、基因及Bmo-miR-79 mimics合成 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·试剂配方 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-26页 |
| ·双荧光素酶重组载体构建 | 第21-24页 |
| ·bmo-miR-79靶基因结合位点的双荧光素酶报告基因法验证 | 第24-26页 |
| 3 结果 | 第26-32页 |
| ·BmEm4基因 3’UTR区miRNA结合靶位点的分析及其突变 | 第26-27页 |
| ·重组载体构建示意图 | 第27-28页 |
| ·重组载体鉴定 | 第28-29页 |
| ·双荧光素酶活性检测及数据处理 | 第29-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 家蚕细胞中过表达bmo-miR-79对BmEm4蛋白表达的影响 | 第34-45页 |
| 1 材料、试剂及仪器 | 第34-37页 |
| ·主要材料、试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·试剂配方 | 第34-37页 |
| 2 方法 | 第37-41页 |
| ·家蚕细胞的培养及转染 | 第37-38页 |
| ·Nothern Blotting鉴定 | 第38-39页 |
| ·家蚕BmN细胞的收集及总蛋白的提取 | 第39页 |
| ·BCA法测定总蛋白溶液浓度 | 第39-40页 |
| ·BmEm4蛋白的Western Blotting检测 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-43页 |
| ·家蚕BmN细胞中bmo-miR-79上调的Nothern blotting鉴定 | 第41页 |
| ·样品总蛋白溶液浓度的测定 | 第41-42页 |
| ·BmEm4蛋白的Westren Blotting检测 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 家蚕bmo-miR-79及其靶基因BmEm4在家蚕不同发育时期的表达谱鉴定 | 第45-55页 |
| 1 材料、试剂及仪器 | 第45-46页 |
| ·主要材料、试剂 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45页 |
| ·试剂配方 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| ·荧光定量PCR | 第46-47页 |
| ·Western Blotting检测BmEm4蛋白 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-53页 |
| ·家蚕各个发育时期BmEm4基因及bmo-mi R-79的转录水平分析 | 第48-51页 |
| ·家蚕各个发育时期BmEm4蛋白的表达分析 | 第51-53页 |
| ·家蚕各个发育时期BmEm4相对蛋白表达量分析 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第六章 bmo-miR-79与BmAGO2蛋白的互作分析 | 第55-63页 |
| 1 材料、试剂及仪器 | 第55-57页 |
| ·主要材料、试剂 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55页 |
| ·试剂配方 | 第55-57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| ·BmAGO2蛋白表达纯化 | 第57-58页 |
| ·Bmo-miR-79 mimics的生物素标记 | 第58页 |
| ·Bmo-miR-79与BmAGO2蛋白的凝胶阻滞(EMSA)鉴定 | 第58-60页 |
| 3 结果 | 第60-62页 |
| ·BmAGO2蛋白表达纯化鉴定 | 第60页 |
| ·BmAGO2蛋白与bmo-miR-79的凝胶阻滞鉴定 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
