| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-16页 |
| 1 条纹斑竹鲨的研究概况 | 第13页 |
| 2 GSTP1的研究进展 | 第13-14页 |
| 3 miRNA的研究进展 | 第14页 |
| 4 转录组测序研究现状 | 第14-16页 |
| 第二章 实验方案 | 第16-18页 |
| 1 实验目的与意义 | 第16页 |
| 2 实验内容 | 第16-17页 |
| 3 实验流程图 | 第17-18页 |
| 第三章 鲨鱼肝脏中GSTP1的发现及鉴定 | 第18-33页 |
| 1 材料与试剂 | 第18-19页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-26页 |
| ·鲨鱼的饲养 | 第19页 |
| ·鲨鱼肝脏 1/3 部分切除再生模型建立 | 第19-20页 |
| ·手术前准备 | 第19-20页 |
| ·肝脏 1/3 部分切除手术 | 第20页 |
| ·条纹斑竹鲨肝再生相关基因的筛选与GSTP1的发现 | 第20-26页 |
| ·转录组建库流程 | 第20页 |
| ·生物信息分析流程 | 第20-22页 |
| ·GO功能显著性富集分析 | 第22页 |
| ·富集性差异基因整合表达模式 | 第22-23页 |
| ·对筛选出的差异基因进行Real-Time PCR验证 | 第23-26页 |
| 3 结果 | 第26-31页 |
| ·转录组测序数据质量预处理结果总览 | 第26页 |
| ·筛选出的差异基因 | 第26-28页 |
| ·差异基因的GO富集结果 | 第28-29页 |
| ·富集性差异基因整合表达模式分析结果 | 第29页 |
| ·总RNA提取结果 | 第29-30页 |
| ·qRT-PCR结果分析 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第四章 筛选调控GSTP1基因表达的miRNA | 第33-43页 |
| 1 材料与试剂 | 第33页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-38页 |
| ·Shark GSTP13’UTR的获得 | 第33页 |
| ·靶定miRNA的筛选 | 第33页 |
| ·3'UTR突变序列的引物设计 | 第33-34页 |
| ·3'UTR突变序列PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·PCR产物割胶回收 | 第35页 |
| ·双酶切及连接反应 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·用CaCl_2法制备E. coli TG1、BL21（DE3）感受态细胞 | 第35页 |
| ·重组质粒的转化 | 第35页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第35-37页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第35-36页 |
| ·质粒的小量制备 | 第36页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第36页 |
| ·双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第37页 |
| ·筛选能靶定到GSTP1的miRNAs并合成minics | 第37页 |
| ·质粒的提取 | 第37页 |
| ·细胞转染 | 第37-38页 |
| ·人肝癌Huh7细胞培养 | 第37页 |
| ·分别将质粒转染入Huh 7 细胞 | 第37-38页 |
| ·细胞裂解与荧光素酶报告基因检测 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-41页 |
| ·筛选靶定到Shark GSTP13’UTR的miRNA | 第38页 |
| ·3’UTR突变序列PCR扩增结果 | 第38-39页 |
| ·3’UTR及其突变序列重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·质粒提取 | 第40页 |
| ·荧光信号值的处理 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 GSTP1多克隆抗体的制备 | 第43-57页 |
| 1 条纹斑竹鲨GSTP1基因的原核表达及产物纯化 | 第43-49页 |
| ·材料与试剂 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·试剂和仪器 | 第43页 |
| ·主要试剂的配置 | 第43-46页 |
| ·方法 | 第46-49页 |
| ·GSTP1基因的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·shark-GSTP1的抗原性分析 | 第47页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-GSTP1的构建 | 第47页 |
| ·连接产物的转化 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第48页 |
| ·重组质粒在E. coli BL21中的诱导表达 | 第48页 |
| ·Shark GSTP1的纯化 | 第48页 |
| ·纯化抗原的检测（Western Blotting） | 第48-49页 |
| 2 重组Shark GSTP1多克隆抗体的制备 | 第49-51页 |
| ·材料与试剂 | 第49-50页 |
| ·材料与试剂 | 第49页 |
| ·主要试剂的配制 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·抗原的制备 | 第50页 |
| ·免疫动物及多抗的制备 | 第50页 |
| ·血清多抗效价的测定（间接ELISA） | 第50-51页 |
| ·抗体特异性的Western Blotting鉴定 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-55页 |
| ·GSTP1的抗原表位分析 | 第51-52页 |
| ·重组表达载体pET-28a(+)-GSTP1的构建 | 第52-53页 |
| ·GSTP1的PCR扩增 | 第52页 |
| ·重组表达载体pET-28a(+)-GSTP1的鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组表达载体pET-28a(+)-GSTP1的序列测定 | 第53页 |
| ·蛋白His- Shark GSTP1表达纯化的结果 | 第53-54页 |
| ·血清多抗效价检测 | 第54页 |
| ·血清多抗的Western Blotting分析 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第六章 Shark GSTP1蛋白及其互作蛋白的鉴定 | 第57-63页 |
| 1 试剂与仪器 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| ·兔血清抗体的纯化 | 第57-58页 |
| ·质谱鉴定 | 第58页 |
| ·Shark GSTP1互作蛋白的研究（Co-IP） | 第58-59页 |
| 3 实验结果 | 第59-62页 |
| ·多抗的亲和纯化 | 第59-60页 |
| ·Co-IP的结果 | 第60-61页 |
| ·质谱分析结果 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
