| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·鸭肝炎病毒的病原特性 | 第11-12页 |
| ·鸭肝炎病毒分类地位 | 第12页 |
| ·鸭肝炎病毒的致病性 | 第12-13页 |
| ·鸭肝炎病毒的诊断方法 | 第13-14页 |
| ·鸭肝炎病毒的基因结构及其功能 | 第14-16页 |
| ·小RNA 病毒的基因组结构及其蛋白组成 | 第14-15页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒的基因组结构特点及其功能 | 第15-16页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒蛋白作用及其特性 | 第16-17页 |
| ·新型鸭肝炎病毒主要特点 | 第17页 |
| ·单克隆抗体的研究进展、检测优势及应用 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的意义 | 第18-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-38页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·毒株与血清 | 第20页 |
| ·载体与菌株 | 第20页 |
| ·试验动物、细胞及抗原 | 第20页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第20页 |
| ·序列分析软件 | 第20页 |
| ·引物设计软件 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·原核表达重组质粒的构建及鉴定 | 第22-31页 |
| ·VP1 和3D 表达引物的设计 | 第22页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR 扩增及检测 | 第23页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第23页 |
| ·pMD18-T 载体克隆质粒的构建及鉴定 | 第23-26页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第26页 |
| ·重组表达质粒在E.coli BL21 菌中的诱导表达及鉴定 | 第26-30页 |
| ·重组蛋白3D 的纯化及鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白3D 的单克隆抗体的制备及鉴定 | 第31-38页 |
| ·BALB/c 小鼠的免疫 | 第31页 |
| ·间接ELISA 方法的建立 | 第31-32页 |
| ·细胞融合 | 第32-33页 |
| ·阳性杂交瘤细胞孔的筛选 | 第33页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体的制备及纯化 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第34-36页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-49页 |
| ·DHV-1C W 株VP1 和3D 基因的扩增 | 第38页 |
| ·原核表达重组质粒的鉴定 | 第38-41页 |
| ·原核表达重组质粒的酶切鉴定 | 第38页 |
| ·原核表达重组质粒的PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·原核表达重组质粒的测序鉴定 | 第38-41页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第41-43页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳分析 | 第41页 |
| ·表达产物的Western-blot 分析 | 第41-43页 |
| ·纯化重组表达蛋白3D 的检测 | 第43-44页 |
| ·间接ELISA 方法的建立 | 第44-45页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第45页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第45-49页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第45页 |
| ·单克隆抗体的Western-blot 分析 | 第45-46页 |
| ·单克隆抗体的DOT 分析 | 第46页 |
| ·单克隆抗体的免疫组织化学分析 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体的免疫荧光分析 | 第47页 |
| ·单克隆抗体特异性检测 | 第47-48页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第48页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性的测定 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·重组质粒BPET-30A-VP1-3 和BPET-30A-3D-8 的构建 | 第49页 |
| ·重组质粒BPET-30A-VP1-3 和BPET-30A-3D-8 的表达 | 第49页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第49-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
