| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 主要符号表 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| ·猪圆环病毒简介 | 第10-12页 |
| ·猪圆环病毒的发现 | 第10页 |
| ·猪圆环病毒的病原特征 | 第10-11页 |
| ·猪圆环病毒的基因组特征 | 第11页 |
| ·猪圆环病毒ORF2基因特征 | 第11-12页 |
| ·猪圆环病毒疫苗研究进展 | 第12-14页 |
| ·PCV灭活疫苗 | 第12-13页 |
| ·弱毒疫苗 | 第13页 |
| ·重组疫苗 | 第13-14页 |
| ·亚单位疫苗 | 第14页 |
| ·两种蛋白表达系统简介 | 第14-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统简介 | 第14-16页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统简介 | 第16-18页 |
| ·本课题研究的目的及主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 大肠杆菌表达系统的构建及表达 | 第20-38页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·主要酶及试剂 | 第20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| ·主要溶液和试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第22-23页 |
| ·主要仪器与设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第23-24页 |
| ·PCR及菌液PCR | 第24页 |
| ·DNA的片段回收 | 第24页 |
| ·DNA片段的酶切、酶连 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第24-25页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第25-26页 |
| ·实验结果与分析 | 第26-36页 |
| ·全长ORF2基因表达载体的构建及表达 | 第26-30页 |
| ·截短ORF2基因表达载体的构建及表达 | 第30-33页 |
| ·优化全长ORF2基因表达载体的构建及表达 | 第33-36页 |
| ·本章小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌外分泌表达系统的构建及表达 | 第38-66页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·PCR引物 | 第39-40页 |
| ·主要溶液和试剂的配制 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·枯草芽孢杆菌Spizizen法感受态细胞的制备及转化 | 第40页 |
| ·菌体总RNA的抽提及杂质DNA的去除 | 第40-41页 |
| ·cDNA的合成 | 第41页 |
| ·参考基因的选择 | 第41-42页 |
| ·荧光定量PCR引物设计 | 第42页 |
| ·引物专一性的检测 | 第42页 |
| ·SYBR Green实时定量PCR | 第42-43页 |
| ·实验结果及分析 | 第43-63页 |
| ·pHT43表达载体多克隆位点的改造 | 第43-46页 |
| ·IPTG诱导的枯草芽孢杆菌外分泌表达系统的构建及表达 | 第46-52页 |
| ·木糖诱导的枯草芽孢杆菌外分泌表达系统的构建及表达 | 第52-56页 |
| ·实时荧光定量法分析外分泌系统ORF2基因的mRNA表达 | 第56-63页 |
| ·本章小结与讨论 | 第63-66页 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌胞内表达系统的构建及表达 | 第66-78页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·菌株和质粒 | 第66页 |
| ·PCR引物 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·实验结果及分析 | 第67-76页 |
| ·pHT43表达载体去除信号肽及多克隆位点的改造 | 第67-69页 |
| ·胞内表达系统诱导表达截短ORF2基因 | 第69-71页 |
| ·胞内表达系统诱导表达优化ORF2全长基因 | 第71-74页 |
| ·胞内表达系统诱导表达优化ORF2截短基因 | 第74-76页 |
| ·本章小结与讨论 | 第76-78页 |
| 总结与展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
| 个人简历 | 第89页 |
