| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| ·环糊精与环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase) | 第10-11页 |
| ·CGTase研究进展 | 第11-20页 |
| ·产CGTase菌种的筛选及CGTase的定向改造 | 第11-12页 |
| ·CGTase的分离纯化 | 第12-14页 |
| ·CGTase的酶学性质 | 第14-16页 |
| ·CGTase基因的克隆与表达 | 第16-17页 |
| ·CGTase的应用研究 | 第17-20页 |
| ·CGTase国内外研究现状及存在的问题 | 第20页 |
| ·产嗜热酶地芽孢杆菌的相关研究 | 第20-21页 |
| ·论文选题依据及研究意义 | 第21-22页 |
| ·论文主要研究内容与创新点 | 第22-24页 |
| ·论文主要研究内容 | 第22页 |
| ·论文主要创新点与特色 | 第22-24页 |
| 第二章 地芽孢杆菌CHB1产CGTase的分离纯化及其酶学特性 | 第24-48页 |
| ·前言 | 第24-25页 |
| ·材料 | 第25-29页 |
| ·供试菌株 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·常用贮存液及其配制 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-35页 |
| ·菌株活化 | 第29页 |
| ·种子培养 | 第29页 |
| ·菌株摇瓶发酵 | 第29页 |
| ·CGTase的活性测定 | 第29-30页 |
| ·定性检测 | 第29页 |
| ·定量测定 | 第29-30页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第30-31页 |
| ·CHB1菌株产CGTase的分离纯化 | 第31-33页 |
| ·粗酶液制备 | 第31-32页 |
| ·饱和硫酸铵沉淀 | 第32页 |
| ·DEAE-SepharoseTM Fast Flow弱阴离子交换柱层析 | 第32页 |
| ·Sephadex G-100凝胶柱层析 | 第32-33页 |
| ·制备电泳 | 第33页 |
| ·CGTase的纯度鉴定及相对分子量的测定 | 第33页 |
| ·CGTase的酶谱分析 | 第33-34页 |
| ·CHB1菌株产CGTase的基本酶学特性 | 第34-35页 |
| ·温度对酶催化活性及稳定性的影响 | 第34页 |
| ·pH对酶催化活性及稳定性的影响 | 第34页 |
| ·金属离子及抑制剂对酶催化活性的影响 | 第34页 |
| ·酶促反应动力学参数测定 | 第34-35页 |
| ·酶作用可溶性淀粉产物的HPLC分析 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-46页 |
| ·CHB1菌株产CGTase的分离纯化 | 第35-37页 |
| ·CHB1菌株产CGTase的基本酶学特性 | 第37-46页 |
| ·酶的相对分子质量 | 第37-38页 |
| ·酶的最适反应温度 | 第38-39页 |
| ·酶的热稳定性 | 第39-40页 |
| ·酶的最适反应pH | 第40-41页 |
| ·酶的pH稳定性 | 第41-42页 |
| ·金属离子及抑制剂对酶催化活性的影响 | 第42-43页 |
| ·酶促反应动力学参数测定 | 第43-44页 |
| ·酶作用可溶性淀粉的产物分析 | 第44-46页 |
| ·本章小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 地芽孢杆菌CHB1菌株CGTase基因的克隆与表达 | 第48-73页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第48-49页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·常用贮存液及其配制 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-57页 |
| ·地芽孢杆菌CHB1菌株基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第51页 |
| ·质粒DNA的限制性酶切 | 第51-52页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第52-53页 |
| ·胶回收目的DNA片段 | 第53页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第54页 |
| ·CHB1菌株CGTase基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·分泌型表达质粒的构建与验证 | 第55页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第55页 |
| ·重组CGTase的SDS-PAGE电泳分析 | 第55-56页 |
| ·重组CGTase的酶谱分析 | 第56页 |
| ·重组CGTase的活性测定 | 第56页 |
| ·重组CGTase胞外表达条件优化 | 第56页 |
| ·胞外重组CGTase的镍柱亲和纯化 | 第56页 |
| ·重组CGTase作用不同底物产物的HPLC分析 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-70页 |
| ·CHB1菌株CGTase基因的克隆及其序列分析 | 第57-59页 |
| ·CHB1菌株CGTase基因的T-A克隆与验证 | 第59页 |
| ·分泌型表达质粒的构建与验证 | 第59-60页 |
| ·重组CGTase的SDS-PAGE电泳及酶谱分析 | 第60-62页 |
| ·重组CGTase胞外表达条件优化 | 第62-67页 |
| ·诱导温度对重组CGTase胞外表达的影响 | 第62-63页 |
| ·IPTG浓度对重组CGTase胞外表达的影响 | 第63-64页 |
| ·诱导起始菌体浓度对重组CGTase胞外表达的影响 | 第64-65页 |
| ·诱导时间对重组CGTase胞外表达的影响 | 第65-66页 |
| ·化学添加剂对重组CGTase胞外表达的影响 | 第66-67页 |
| ·胞外重组CGTase的镍柱亲和纯化 | 第67-68页 |
| ·重组CGTase作用不同底物产物的HPLC分析 | 第68-70页 |
| ·本章小结与讨论 | 第70-73页 |
| 第四章 结论与展望 | 第73-76页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| ·展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 个人简历 | 第85页 |
