| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·N-乙酰神经氨酸的简介 | 第11页 |
| ·N-乙酰神经氨酸的生理功能 | 第11-13页 |
| ·提高婴儿的智力和记忆力 | 第12页 |
| ·抗老年痴呆 | 第12页 |
| ·抗识别、提高肠道对维生素和矿物质的吸收 | 第12页 |
| ·抗菌排毒、抗病毒 | 第12-13页 |
| ·N-乙酰神经氨酸的应用 | 第13-14页 |
| ·唾液酸在食品领域的应用 | 第13页 |
| ·唾液酸在医药领域的应用 | 第13页 |
| ·唾液酸在疾病诊断中的应用 | 第13-14页 |
| ·N-乙酰神经氨酸的生产方法 | 第14-18页 |
| ·天然原料提取法 | 第14-15页 |
| ·化学合成法 | 第15页 |
| ·酶及固定化酶法 | 第15-16页 |
| ·全细胞生物催化 | 第16页 |
| ·微生物发酵法 | 第16-18页 |
| ·N-乙酰神经氨酸含量的检测方法 | 第18-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌的形态特征 | 第19页 |
| ·枯草芽孢杆菌用于工业化生产的优点及其应用 | 第19-20页 |
| ·本课题的立题意义和研究内容 | 第20-22页 |
| ·课题的立题意义 | 第20页 |
| ·论文研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·实验材料与仪器 | 第22-25页 |
| ·实验用菌株、质粒和引物 | 第22-23页 |
| ·实验用酶和试剂 | 第23-24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24页 |
| ·实验用培养基 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-36页 |
| ·细菌质粒DNA的抽提及纯化(质粒小量制备试剂盒) | 第25-26页 |
| ·引物的设计和PCR扩增 | 第26页 |
| ·PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| ·TA克隆 | 第27页 |
| ·目的DNA片段和质粒载体的酶切以及连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌DH5 α化转超级感受态的制备 | 第27-29页 |
| ·质粒转化大肠杆菌DH5 α感受态 | 第29页 |
| ·克隆的验证 | 第29页 |
| ·高效液相色谱分析方法 | 第29页 |
| ·枯草芽孢杆菌与N-已酰神经氨酸的关系 | 第29-30页 |
| ·枯草芽孢杆菌电转感受态的制备 | 第30-31页 |
| ·B.subtilis 164/pHT01-neuBC,B.subtilis 168/pHT01-neuBC产N-乙酰神经氨酸的发酵性能验证 | 第31页 |
| ·产Neu5Ac的菌株的选择 | 第31页 |
| ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC产Neu5Ac的培养基组分和发酵条件优化 | 第31-33页 |
| ·IPTG的加入时期对B.subtilis 168/pHT01-neuBC发酵产Neu5Ac影响 | 第31-32页 |
| ·(NH_4)_2SO_4浓度优化 | 第32页 |
| ·蛋白胨+酵母粉浓度优化 | 第32页 |
| ·MgSO4·7H_2O浓度优化 | 第32页 |
| ·K_2HPO_4浓度优化 | 第32页 |
| ·维生素B1浓度优化 | 第32页 |
| ·微量元素浓度优化 | 第32-33页 |
| ·IPTG浓度优化 | 第33页 |
| ·最适pH的选择 | 第33页 |
| ·摇瓶发酵B.subtilis 168/pHT01-neuBC生产Neu5Ac的最大产量 | 第33页 |
| ·发酵罐放大发酵生产Neu5Ac | 第33-34页 |
| ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC低产N-乙酰神经氨酸的原因分析 | 第34-35页 |
| ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC的质粒稳定性 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白表达 | 第34-35页 |
| ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC与B.subtilis 168/pHT01-neuBC-glmS发酵产Neu5Ac性能的比较 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-63页 |
| ·N-乙酰神经氨酸标准曲线的绘制 | 第36页 |
| ·枯草芽孢杆菌与N-乙酰神经氨酸的关系 | 第36-37页 |
| ·pHT01-neuBC质粒的构建 | 第37-43页 |
| ·NeuBC片段的获得 | 第37-39页 |
| ·pHT01质粒的抽提 | 第39-40页 |
| ·NeuBC片段和pHT01质粒的双酶切、连接及转化 | 第40-41页 |
| ·阳性克隆的菌落PCR验证 | 第41页 |
| ·pHT01-neuBC质粒的抽提 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的酶切验证 | 第42-43页 |
| ·B.subtilis 164/pHT01-neuBC,B.subtilis 168/pHT01-neuBC发酵产Neu5Ac | 第43-45页 |
| ·用于发酵生产Neu5Ac的菌株的选择 | 第45-46页 |
| ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC产Neu5Ac培养基组分和发酵条件的优化 | 第46-55页 |
| ·IPTG加入时期对B.subtilis 168/pHT01-neuBC发酵生产Neu5Ac的影响 | 第46-47页 |
| ·(NH_4)_2SO_4浓度优化 | 第47-48页 |
| ·蛋白胨+酵母粉浓度优化 | 第48-49页 |
| ·K_2HPO_4浓度优化 | 第49-50页 |
| ·MgSO_4·7H_2O浓度优化 | 第50-51页 |
| ·维生素B1浓度优化 | 第51-52页 |
| ·微量元素浓度优化 | 第52-53页 |
| ·IPTG浓度优化 | 第53-54页 |
| ·最适pH的选择 | 第54-55页 |
| ·发酵培养基优化结果 | 第55页 |
| ·摇瓶发酵B.subtilis 168/pHT01-neuBC的最大产量 | 第55-56页 |
| ·发酵罐的放大发酵 | 第56页 |
| ·低产N-乙酰神经氨酸的原因分析 | 第56-59页 |
| ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC胞内Neu5Ac检测 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白的表达 | 第57-58页 |
| ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC的质粒稳定性 | 第58-59页 |
| ·pHT01-neuBC-glmS重组质粒的构建 | 第59-61页 |
| ·glmS目的片段的获得及加“A” | 第59-60页 |
| ·TA克隆 | 第60页 |
| ·glmS的菌落PCR验证 | 第60-61页 |
| ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC-glmS的发酵性能验证 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
