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微生物发酵法生产N-乙酰神经氨酸的研究

摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第一章 文献综述第11-22页
   ·N-乙酰神经氨酸的简介第11页
   ·N-乙酰神经氨酸的生理功能第11-13页
     ·提高婴儿的智力和记忆力第12页
     ·抗老年痴呆第12页
     ·抗识别、提高肠道对维生素和矿物质的吸收第12页
     ·抗菌排毒、抗病毒第12-13页
   ·N-乙酰神经氨酸的应用第13-14页
     ·唾液酸在食品领域的应用第13页
     ·唾液酸在医药领域的应用第13页
     ·唾液酸在疾病诊断中的应用第13-14页
   ·N-乙酰神经氨酸的生产方法第14-18页
     ·天然原料提取法第14-15页
     ·化学合成法第15页
     ·酶及固定化酶法第15-16页
     ·全细胞生物催化第16页
     ·微生物发酵法第16-18页
   ·N-乙酰神经氨酸含量的检测方法第18-19页
   ·枯草芽孢杆菌的形态特征第19页
   ·枯草芽孢杆菌用于工业化生产的优点及其应用第19-20页
   ·本课题的立题意义和研究内容第20-22页
     ·课题的立题意义第20页
     ·论文研究内容第20-22页
第二章 材料与方法第22-36页
   ·实验材料与仪器第22-25页
     ·实验用菌株、质粒和引物第22-23页
     ·实验用酶和试剂第23-24页
     ·主要实验仪器第24页
     ·实验用培养基第24-25页
   ·实验方法第25-36页
     ·细菌质粒DNA的抽提及纯化(质粒小量制备试剂盒)第25-26页
     ·引物的设计和PCR扩增第26页
     ·PCR产物的回收第26-27页
     ·TA克隆第27页
     ·目的DNA片段和质粒载体的酶切以及连接第27页
     ·大肠杆菌DH5 α化转超级感受态的制备第27-29页
     ·质粒转化大肠杆菌DH5 α感受态第29页
     ·克隆的验证第29页
     ·高效液相色谱分析方法第29页
     ·枯草芽孢杆菌与N-已酰神经氨酸的关系第29-30页
     ·枯草芽孢杆菌电转感受态的制备第30-31页
     ·B.subtilis 164/pHT01-neuBC,B.subtilis 168/pHT01-neuBC产N-乙酰神经氨酸的发酵性能验证第31页
     ·产Neu5Ac的菌株的选择第31页
     ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC产Neu5Ac的培养基组分和发酵条件优化第31-33页
       ·IPTG的加入时期对B.subtilis 168/pHT01-neuBC发酵产Neu5Ac影响第31-32页
       ·(NH_4)_2SO_4浓度优化第32页
       ·蛋白胨+酵母粉浓度优化第32页
       ·MgSO4·7H_2O浓度优化第32页
       ·K_2HPO_4浓度优化第32页
       ·维生素B1浓度优化第32页
       ·微量元素浓度优化第32-33页
       ·IPTG浓度优化第33页
       ·最适pH的选择第33页
     ·摇瓶发酵B.subtilis 168/pHT01-neuBC生产Neu5Ac的最大产量第33页
     ·发酵罐放大发酵生产Neu5Ac第33-34页
     ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC低产N-乙酰神经氨酸的原因分析第34-35页
       ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC的质粒稳定性第34页
       ·SDS-PAGE检测目的蛋白表达第34-35页
     ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC与B.subtilis 168/pHT01-neuBC-glmS发酵产Neu5Ac性能的比较第35-36页
第三章 结果与讨论第36-63页
   ·N-乙酰神经氨酸标准曲线的绘制第36页
   ·枯草芽孢杆菌与N-乙酰神经氨酸的关系第36-37页
   ·pHT01-neuBC质粒的构建第37-43页
     ·NeuBC片段的获得第37-39页
     ·pHT01质粒的抽提第39-40页
     ·NeuBC片段和pHT01质粒的双酶切、连接及转化第40-41页
     ·阳性克隆的菌落PCR验证第41页
     ·pHT01-neuBC质粒的抽提第41-42页
     ·阳性克隆的酶切验证第42-43页
   ·B.subtilis 164/pHT01-neuBC,B.subtilis 168/pHT01-neuBC发酵产Neu5Ac第43-45页
   ·用于发酵生产Neu5Ac的菌株的选择第45-46页
   ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC产Neu5Ac培养基组分和发酵条件的优化第46-55页
     ·IPTG加入时期对B.subtilis 168/pHT01-neuBC发酵生产Neu5Ac的影响第46-47页
     ·(NH_4)_2SO_4浓度优化第47-48页
     ·蛋白胨+酵母粉浓度优化第48-49页
     ·K_2HPO_4浓度优化第49-50页
     ·MgSO_4·7H_2O浓度优化第50-51页
     ·维生素B1浓度优化第51-52页
     ·微量元素浓度优化第52-53页
     ·IPTG浓度优化第53-54页
     ·最适pH的选择第54-55页
     ·发酵培养基优化结果第55页
   ·摇瓶发酵B.subtilis 168/pHT01-neuBC的最大产量第55-56页
   ·发酵罐的放大发酵第56页
   ·低产N-乙酰神经氨酸的原因分析第56-59页
     ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC胞内Neu5Ac检测第57页
     ·SDS-PAGE检测目的蛋白的表达第57-58页
     ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC的质粒稳定性第58-59页
   ·pHT01-neuBC-glmS重组质粒的构建第59-61页
     ·glmS目的片段的获得及加“A”第59-60页
     ·TA克隆第60页
     ·glmS的菌落PCR验证第60-61页
   ·B.subtilis 168/pHT01-neuBC-glmS的发酵性能验证第61-63页
结论第63-64页
参考文献第64-68页
致谢第68页

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