| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-20页 |
| 1.核盘菌研究进展 | 第9-12页 |
| ·核盘菌基本特性及其危害 | 第9-10页 |
| ·菌核及其形成机理 | 第10-12页 |
| ·菌核特性 | 第10页 |
| ·菌核形成过程 | 第10-11页 |
| ·影响菌核形成的因素 | 第11-12页 |
| 2 基因功能的研究方法 | 第12-15页 |
| ·正向遗传学和反向遗传学 | 第12-13页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第13-15页 |
| ·序列分析 | 第13页 |
| ·基因表达分析 | 第13-14页 |
| ·基因的功能预测 | 第14页 |
| ·基因功能的实验验证 | 第14-15页 |
| 3 RNAI在基因功能研究中的应用 | 第15-18页 |
| ·RNAi技术的研究背景 | 第15-16页 |
| ·RNAi的分子机制 | 第16页 |
| ·siRNAs的获得途径 | 第16-17页 |
| ·RNAi技术在真菌基因功能研究上的应用 | 第17-18页 |
| 4 跨膜转运体—MFS | 第18-19页 |
| 5 本实验的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 核盘菌菌核形成相关基因的筛选及基因SS-MFS沉默载体的构建 | 第20-34页 |
| 1.材料与方法 | 第20-28页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·菌株 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·质粒及质粒抽提用溶液 | 第21页 |
| ·其它溶液及试剂 | 第21-22页 |
| ·限制性内切酶、试剂盒及其它试剂 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-28页 |
| ·菌核形成相关基因的筛选 | 第22页 |
| ·核盘菌Ss-MFS基因的序列分析 | 第22页 |
| ·核盘菌Ss-MFS基因的表达动态 | 第22-23页 |
| ·核盘菌基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·沉默片段的克隆 | 第24页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第24-25页 |
| ·目的片段与克隆质粒连接 | 第25页 |
| ·重组质粒的热击转化 | 第25页 |
| ·重组质粒的筛选、鉴定和质粒提取 | 第25-26页 |
| ·基因Ss-MFS沉默载体的构建 | 第26-27页 |
| ·重组质粒农杆菌热击转化 | 第27页 |
| ·农杆菌重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-32页 |
| ·菌核形成相关基因Ss-MFS的筛选 | 第28页 |
| ·丛因Ss-MFS的序列分析 | 第28-29页 |
| ·核盘菌Ss-MFS基因的表达动态 | 第29-30页 |
| ·基因Ss-MFS沉默片段的克隆、回收及鉴定 | 第30页 |
| ·基因Ss-MFS沉默载体的构建 | 第30-31页 |
| ·含重组质粒农杆菌转化及验证 | 第31-32页 |
| 3 小结与讨论 | 第32-34页 |
| ·小结 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 核盘菌遗传转化及SS-MFS基因功能的初步研究 | 第34-47页 |
| 1. 材料与方法 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·菌株及载体 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·农杆菌介导转化用培养基及培养液 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·农杆菌介导的核盘菌遗传转化 | 第35-36页 |
| ·转化子ITS验证 | 第36页 |
| ·转化子PCR鉴定 | 第36页 |
| ·转化子生物学特性分析 | 第36页 |
| ·转化子寄生胡萝卜产菌核能力的检测 | 第36页 |
| ·转化子产酸能力的检测 | 第36-37页 |
| ·转化子致病力的测定 | 第37页 |
| ·利用半定量RT-PCR分析转化子Ss-MFS基因的表达情况 | 第37页 |
| ·利用Real-time PCR分析转化子Ss-MFS基因的表达 | 第37页 |
| ·转化子在不同碳源培养基上的生长情况测定 | 第37页 |
| ·实验数据的处理与分析 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·转化子ITS验证 | 第38页 |
| ·转化子PCR鉴定 | 第38页 |
| ·转化子形态特征观察 | 第38-39页 |
| ·转化子中Ss-MFS基因的表达检测 | 第39-40页 |
| ·转化子显微形态观察 | 第40-41页 |
| ·转化子生长速度的测定 | 第41页 |
| ·转化子产菌核能力的测定 | 第41-42页 |
| ·转化子寄生胡萝卜产菌核能力的检测 | 第42页 |
| ·转化子致病力的测定 | 第42-43页 |
| ·转化子产酸能力的测定 | 第43-44页 |
| ·转化子在不同碳源培养基上的生长情况测定 | 第44-45页 |
| 3 小结与讨论 | 第45-47页 |
| ·小结 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 结论与展望 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
