| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 符号、变量、缩略词 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| ·β-甘露聚糖及低聚甘露糖的概述 | 第13-16页 |
| ·β-甘露聚糖的结构与分类 | 第13-14页 |
| ·低聚甘露糖的性质与应用 | 第14-15页 |
| ·低聚甘露糖的生产方法 | 第15页 |
| ·酶法生产低聚甘露糖的研究进展 | 第15-16页 |
| ·β-甘露聚糖酶的概述 | 第16-22页 |
| ·β-甘露聚糖酶的来源 | 第17-18页 |
| ·β-甘露聚糖酶的性质 | 第18-19页 |
| ·β-甘露聚糖酶的应用 | 第19-20页 |
| ·β-甘露聚糖酶的国内外研究进展 | 第20-22页 |
| ·酶分子改造的研究进展 | 第22-26页 |
| ·定向进化 | 第22-23页 |
| ·半理性设计 | 第23-24页 |
| ·计算机辅助的理性设计 | 第24-26页 |
| ·本论文的立题依据及主要研究内容 | 第26-28页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第26页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 AuMan5A 的基因克隆及生物信息学分析 | 第28-44页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·材料与方法 | 第28-36页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第28-29页 |
| ·菌种、质粒和主要试剂 | 第29页 |
| ·常用的生物信息学软件及网站 | 第29页 |
| ·主要培养基及相关溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·分子生物学实验操作 | 第30-32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| ·A. usamii YL-01-78 菌株总 RNA 和基因组 DNA 的提取 | 第33页 |
| ·AuMan5A 基因全长 cDNA 序列的克隆 | 第33-34页 |
| ·AuMan5A 基因部分 DNA 序列的克隆 | 第34-36页 |
| ·AuMan5A 基因部分 DNA 及其推测氨基酸序列的分析 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-43页 |
| ·AuMan5A 基因全长 cDNA 序列的克隆 | 第36-38页 |
| ·AuMan5A 基因部分 DNA 序列的克隆 | 第38-39页 |
| ·AuMan5A 基因部分 DNA 的序列分析 | 第39-40页 |
| ·AuMan5A 推测的氨基酸序列分析 | 第40-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 AuMan5A 基因在毕赤酵母中的高效表达及突变分析 | 第44-61页 |
| ·引言 | 第44-45页 |
| ·材料与方法 | 第45-51页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第45页 |
| ·菌种、质粒及试剂 | 第45页 |
| ·常用的生物信息学软件及网站 | 第45页 |
| ·主要培养基及相关溶液的配制 | 第45-46页 |
| ·引物的设计与合成 | 第46页 |
| ·AuMan5A 成熟肽编码基因的克隆 | 第46页 |
| ·AuMan5A 突变体编码基因的克隆 | 第46-48页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第48页 |
| ·重组毕赤酵母的构建、筛选与表达 | 第48-49页 |
| ·双重重组子表达条件的优化 | 第49页 |
| ·重组酶 reAuMan5A 的纯化 | 第49-50页 |
| ·重组酶的酶活性及底物谱分析 | 第50页 |
| ·重组酶的蛋白及糖成分分析 | 第50页 |
| ·reAuMan5A 的酶学特性分析 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-60页 |
| ·AuMan5A 及突变体编码基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·P. pastoris GS115 的转化、筛选与表达 | 第53-55页 |
| ·双重重组子表达条件的优化 | 第55-57页 |
| ·reAuMan5A 的纯化及去糖基化分析 | 第57-58页 |
| ·reAuMan5A 的酶学特性分析 | 第58-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第四章 AuMan5A-CBM 融合酶的理性设计与表达 | 第61-74页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-64页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第61-62页 |
| ·菌种、质粒及试剂 | 第62页 |
| ·常用的生物信息学软件及网站 | 第62页 |
| ·主要培养基及相关溶液的配制 | 第62页 |
| ·融合酶的理性设计 | 第62页 |
| ·融合酶编码基因的构建 | 第62-64页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第64页 |
| ·融合酶编码基因在 P. pastoris GS115 中的表达 | 第64页 |
| ·重组融合酶的纯化 | 第64页 |
| ·重组融合酶的酶活性及蛋白分析 | 第64页 |
| ·重组融合酶的部分酶学特性分析 | 第64页 |
| ·重组酶纤维素结合能力的分析 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-73页 |
| ·融合酶的理性设计 | 第64-67页 |
| ·融合酶编码基因的构建 | 第67-69页 |
| ·P. pastoris GS115 转化子的筛选与表达 | 第69-70页 |
| ·重组融合酶 reAuMan5A-CBM 的纯化 | 第70-71页 |
| ·reAuMan5A-CBM 的部分酶学特性分析 | 第71-73页 |
| ·重组融合酶的纤维素结合能力分析 | 第73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 第五章 末端残基及二硫键对β-甘露聚糖酶酶学特性的影响 | 第74-85页 |
| ·引言 | 第74页 |
| ·材料与方法 | 第74-77页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第74页 |
| ·菌种、质粒及试剂 | 第74页 |
| ·常用的生物信息学软件及网站 | 第74-75页 |
| ·主要培养基及相关溶液的配制 | 第75页 |
| ·AuMan5A 截短酶的理性设计 | 第75页 |
| ·AuMan5A 中二硫键的理性引入 | 第75页 |
| ·截短酶及突变酶编码基因的构建 | 第75-76页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第76页 |
| ·截短酶及突变酶编码基因在 P. pastoris GS115 中的表达 | 第76页 |
| ·重组酶的纯化 | 第76页 |
| ·重组酶的酶活性及蛋白分析 | 第76页 |
| ·重组酶的部分酶学特性分析 | 第76-77页 |
| ·结果与讨论 | 第77-84页 |
| ·截短酶的理性设计 | 第77-78页 |
| ·引入二硫键的突变酶的理性设计 | 第78-79页 |
| ·截短酶及突变酶编码基因的构建 | 第79-80页 |
| ·重组截短酶和突变酶的表达及纯化 | 第80-82页 |
| ·重组截短酶和突变酶的性质研究 | 第82-84页 |
| ·本章小结 | 第84-85页 |
| 第六章 重组酶酶法制备低聚甘露糖工艺的研究 | 第85-94页 |
| ·引言 | 第85页 |
| ·材料与方法 | 第85-87页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第85页 |
| ·主要试剂 | 第85页 |
| ·魔芋精粉中糖含量分析 | 第85-86页 |
| ·水解率及平均聚合度的测定及计算 | 第86页 |
| ·魔芋精粉酶法水解条件的研究 | 第86页 |
| ·重组β-内切葡聚糖酶的协同作用研究 | 第86-87页 |
| ·魔芋精粉水解产物的定性分析 | 第87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-93页 |
| ·魔芋精粉中糖含量的测定 | 第87页 |
| ·魔芋精粉酶法水解的工艺研究 | 第87-91页 |
| ·重组β-内切葡聚糖酶的协同作用研究 | 第91-92页 |
| ·水解产物的定性分析 | 第92-93页 |
| ·本章小结 | 第93-94页 |
| 主要结论与展望 | 第94-97页 |
| 主要结论 | 第94-95页 |
| 展望 | 第95-97页 |
| 论文主要创新点 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-106页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第106页 |
