| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·淀粉结构及淀粉加工用酶概述 | 第11-13页 |
| ·淀粉的组成与结构 | 第11-12页 |
| ·淀粉加工用酶制剂 | 第12-13页 |
| ·淀粉脱支酶分类、特点和研究进展 | 第13-18页 |
| ·淀粉脱支酶的分类 | 第13页 |
| ·淀粉脱支酶的底物特异性及结构基础 | 第13-15页 |
| ·普鲁兰酶研究进展 | 第15-17页 |
| ·异淀粉酶研究进展 | 第17-18页 |
| ·淀粉脱支酶的应用 | 第18-19页 |
| ·立项依据及研究意义 | 第19-20页 |
| ·主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 B. deramificans 普鲁兰酶的重组表达及酶学性质研究 | 第21-33页 |
| ·前言 | 第21页 |
| ·材料与方法 | 第21-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第21-22页 |
| ·试剂和仪器 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·基因工程操作 | 第23-24页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵 | 第24页 |
| ·蛋白纯化及分析 | 第24-25页 |
| ·普鲁兰酶活力测定 | 第25-26页 |
| ·重组普鲁兰酶的酶学性质分析 | 第26页 |
| ·重组普鲁兰酶在淀粉糖化中的应用 | 第26-27页 |
| ·HPLC 检测葡萄糖含量 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-32页 |
| ·表达载体的构建及转化子筛选 | 第27-28页 |
| ·重组酶的纯化 | 第28-29页 |
| ·重组普鲁兰酶的最适 pH | 第29-30页 |
| ·重组酶的最适温度及温度稳定性 | 第30页 |
| ·底物特异性分析 | 第30-31页 |
| ·动力学参数的测定 | 第31页 |
| ·重组普鲁兰酶在淀粉糖化中的应用 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第三章 定点突变提高普鲁兰酶的热稳定性及催化效率 | 第33-46页 |
| ·前言 | 第33-34页 |
| ·材料与方法 | 第34-36页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·试剂和仪器 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·基因工程操作 | 第34-35页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵 | 第35页 |
| ·蛋白纯化及分析 | 第35页 |
| ·普鲁兰酶活力测定 | 第35页 |
| ·突变体的酶学性质测定 | 第35页 |
| ·重组普鲁兰酶在淀粉糖化中的应用 | 第35页 |
| ·HPLC 检测葡萄糖含量 | 第35-36页 |
| ·氨基酸序列比对及三维结构模拟 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-45页 |
| ·突变位点的选择 | 第36-38页 |
| ·普鲁兰酶的定点突变、重组表达与纯化 | 第38-39页 |
| ·突变体的酶学性质分析 | 第39-43页 |
| ·突变体在淀粉糖化中的应用 | 第43-44页 |
| ·蛋白结构模拟及分析 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第四章 发酵条件对重组普鲁兰酶可溶性表达的影响 | 第46-61页 |
| ·前言 | 第46页 |
| ·材料与方法 | 第46-49页 |
| ·菌株 | 第46-47页 |
| ·试剂和仪器 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵 | 第47-48页 |
| ·重组菌的 3 L 罐发酵 | 第48页 |
| ·蛋白浓度测定及 SDS-PAGE | 第48页 |
| ·普鲁兰酶活力测定 | 第48页 |
| ·细胞生物量测定 | 第48页 |
| ·细胞透射电镜分析 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-59页 |
| ·重组 B. deramificans 普鲁兰酶容易形成活性蛋白聚集体 | 第49-51页 |
| ·诱导温度对重组菌发酵的影响 | 第51-52页 |
| ·诱导剂浓度对重组菌发酵的影响 | 第52-53页 |
| ·渗透压调节剂对重组菌发酵的影响 | 第53-55页 |
| ·重组菌的高密度发酵条件优化 | 第55-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第五章 N 端结构域切除对普鲁兰酶热稳定性及分泌效率的影响 | 第61-74页 |
| ·前言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-64页 |
| ·菌株与质粒 | 第61页 |
| ·试剂和仪器 | 第61-62页 |
| ·培养基 | 第62页 |
| ·基因工程操作 | 第62-63页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵 | 第63页 |
| ·蛋白纯化及分析 | 第63页 |
| ·普鲁兰酶活力测定 | 第63页 |
| ·酶学性质分析 | 第63页 |
| ·突变体在淀粉糖化中的应用 | 第63页 |
| ·HPLC 检测葡萄糖含量 | 第63页 |
| ·普鲁兰酶蛋白三维结构模拟 | 第63-64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-73页 |
| ·普鲁兰酶 N 端截短突变体的构建、重组表达与纯化 | 第64-67页 |
| ·叠加突变体的构建、表达及纯化 | 第67-69页 |
| ·突变体的酶学性质分析 | 第69-72页 |
| ·突变体在淀粉糖化中的应用 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第六章 T. fusca 异淀粉酶的重组表达及在Α-环糊精制备中的应用 | 第74-89页 |
| ·前言 | 第74页 |
| ·材料与方法 | 第74-79页 |
| ·菌株与质粒 | 第74-75页 |
| ·试剂和仪器 | 第75页 |
| ·培养基 | 第75页 |
| ·基因工程操作 | 第75-77页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵 | 第77页 |
| ·重组酶的分离纯化及 SDS-PAGE | 第77页 |
| ·异淀粉酶活力测定 | 第77-78页 |
| ·重组异淀粉酶的酶学性质分析 | 第78页 |
| ·重组菌的 3 L 罐发酵 | 第78页 |
| ·重组异淀粉酶在α-环糊精制备中的应用 | 第78页 |
| ·HPLC 检测环糊精的含量 | 第78-79页 |
| ·淀粉样品的离子色谱检测 | 第79页 |
| ·结果与讨论 | 第79-87页 |
| ·T. fusca 异淀粉酶编码基因的克隆及序列分析 | 第79-81页 |
| ·质粒的构建及转化子筛选 | 第81页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵及分离纯化 | 第81-82页 |
| ·重组异淀粉酶的酶学性质分析 | 第82-84页 |
| ·重组菌在 3 L 罐中的高密度发酵 | 第84-85页 |
| ·重组酶在环糊精制备中的应用 | 第85-87页 |
| ·小结 | 第87-89页 |
| 主要结论与展望 | 第89-92页 |
| 创新点 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-102页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第102页 |
