| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 中英文缩写对照表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 真核生物启动子研究概述 | 第14-19页 |
| ·真核启动子的结构 | 第14-15页 |
| ·转录因子与启动子 | 第15-17页 |
| ·启动子的研究热点 | 第17-19页 |
| 3 游离脂肪酸的研究进展 | 第19-22页 |
| ·游离脂肪酸 | 第19-21页 |
| ·游离脂肪酸受体 | 第21-22页 |
| 4 O3FAR1基因的研究概述 | 第22-24页 |
| 5 本试验研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-53页 |
| 1 试验材料与试剂 | 第25-29页 |
| ·主要的生化试剂和药品 | 第25页 |
| ·细胞、菌株和载体及猪基因组DNA | 第25-26页 |
| ·试剂盒 | 第26页 |
| ·主要的仪器及设备 | 第26-27页 |
| ·缓冲液和常用试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·主要的生物学软件和网站 | 第28页 |
| ·所用载体 | 第28-29页 |
| 2 试验方法与步骤 | 第29-53页 |
| ·猪不同组织总RNA的提取及cDNA的合成 | 第29页 |
| ·猪O3FAR1基因组织表达谱分析 | 第29-30页 |
| ·猪O3FAR1基因5'端上游调控区域的克隆和分析 | 第30-34页 |
| ·克隆基因5'端上游调控区域 | 第31-34页 |
| ·猪O3FAR1基因5'端上游调控区域的生物信息学分析 | 第34页 |
| ·猪O3FAR1基因5'端上游调控区域的缺失分析 | 第34-39页 |
| ·基因5端上游调控区域缺失载体的构建 | 第34-37页 |
| ·启动子在三种不同真核细胞中的活性分析 | 第37-39页 |
| ·猪O3FAR1基因核心启动子区的寻找及转录因子分析 | 第39页 |
| ·定点突变的验证试验 | 第39-40页 |
| ·构建野生型和突变型的荧光报告载体质粒 | 第39-40页 |
| ·野生型和突变型的荧光报告载体质粒的瞬时转染 | 第40页 |
| ·构建转录因子C/EBPβ | 第40页 |
| ·野生型荧光报告载体质粒与转录因子的共转染 | 第40页 |
| ·转录因子的超表达与RNA干扰 | 第40-45页 |
| ·超表达与RNA干扰定量引物的设计 | 第40-41页 |
| ·转录因子的超表达 | 第41-44页 |
| ·转录因子的RNA干扰试验 | 第44-45页 |
| ·EMSA验证试验 | 第45-50页 |
| ·EMSA探针的设计 | 第45页 |
| ·核蛋白的抽提 | 第45-47页 |
| ·结合反应 | 第47-48页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第48页 |
| ·电转移 | 第48-49页 |
| ·交联固定与化学发光反应 | 第49-50页 |
| ·化学发光图像显示 | 第50页 |
| ·猪O3FAR1基因的超表达试验 | 第50-53页 |
| ·猪O3FAR1基因CDS区的获取 | 第50-51页 |
| ·pcDNA3.1-CDS真核表达载体的构建 | 第51页 |
| ·pcDNA3.1-CDS真核表达载体的瞬时转染实验 | 第51-52页 |
| ·细胞RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第52页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第52-53页 |
| 第三章 结果分析 | 第53-68页 |
| 1 猪O3FAR1基因启动子克隆与功能分析 | 第53-65页 |
| ·猪O3FAR1基因的组织表达谱分析 | 第53页 |
| ·猪O3FAR1基因启动子上游调控区域的克隆及分析 | 第53-56页 |
| ·猪O3FAR1基因5'上游调控序列的获取 | 第53-54页 |
| ·猪O3FAR1基因启动子的生物信息学分析 | 第54-56页 |
| ·猪O3FAR1基因5'上游调控序列的克隆 | 第56页 |
| ·猪O3FAR1启动子缺失载体的构建 | 第56-58页 |
| ·扩增缺失片段 | 第56-57页 |
| ·构建双荧光素酶报告基因载体 | 第57-58页 |
| ·猪O3FAR1启动子活性的检测 | 第58-60页 |
| ·点突变试验验证 | 第60-62页 |
| ·转录因子的超表达试验 | 第62-63页 |
| ·转录因子的RNA干扰试验 | 第63-64页 |
| ·EMSA试验验证结果 | 第64-65页 |
| 2 猪O3FAR1基因的超表达试验 | 第65-68页 |
| ·不同物种O3FAR1基因的生物信息学比对 | 第65页 |
| ·猪O3FAR1基因超表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·超表达载体转染细胞后RNA的获取 | 第66页 |
| ·荧光定量PCR检测猪O3FAR1基因超表达结果 | 第66-68页 |
| 第四章 讨论 | 第68-75页 |
| 1 猪O3FAR1基因的生物信息学与表达谱分析 | 第68-69页 |
| ·猪O3FAR1基因的生物信息学分析 | 第68-69页 |
| ·猪O3FAR1基因的表达谱分析 | 第69页 |
| 2 启动子的活性分析 | 第69-70页 |
| 3 转录因子CEBPβ与猪O3FAR1基因关系的讨论 | 第70-72页 |
| ·超表达结果 | 第70-71页 |
| ·RNA干扰结果 | 第71页 |
| ·转录因子CEBPβ与脂肪组织发育的关系 | 第71-72页 |
| 4 本试验中一些试验技术的讨论 | 第72-75页 |
| ·关于siRNA干扰技术 | 第72-73页 |
| ·关于EMSA试验技术 | 第73-75页 |
| 第五章 小结 | 第75-76页 |
| 1 本研究的主要成果 | 第75页 |
| 2 本研究的不足之处及下一步计划 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录 | 第83-85页 |
