海洋细菌多样性研究及可能致病因子的克隆表达
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·微生物的多样性 | 第13-15页 |
| ·微生物多样性的分类 | 第13-15页 |
| ·生物多样性的意义 | 第15页 |
| ·细菌的鉴定 | 第15-18页 |
| ·表型鉴定 | 第15-16页 |
| ·分子遗传学鉴定 | 第16-18页 |
| ·常见的细菌毒素类型 | 第18-23页 |
| ·细胞内毒素 | 第19页 |
| ·细胞外毒素 | 第19-23页 |
| ·海旋菌的简介 | 第23页 |
| ·本研究的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-42页 |
| ·材料 | 第25-30页 |
| ·主要试剂 | 第25-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·样品来源 | 第28-29页 |
| ·实验菌株 | 第29-30页 |
| ·引物序列 | 第30页 |
| ·深海沉积物中细菌多样性分析方法 | 第30-32页 |
| ·菌株初筛 | 第30页 |
| ·菌株复筛 | 第30页 |
| ·菌种保藏 | 第30-31页 |
| ·CTAB-NaCl法提取细菌基因组DNA | 第31页 |
| ·细菌16S rRNA基因序列的扩增 | 第31-32页 |
| ·可能致病因子表达载体构建 | 第32-37页 |
| ·目的基因提取 | 第32页 |
| ·细菌hlyA基因序列的扩增 | 第32-33页 |
| ·质粒提取 | 第33-34页 |
| ·PCR产物和载体的酶切 | 第34-35页 |
| ·PCR产物和载体的胶回收 | 第35-36页 |
| ·PCR产物和载体的连接 | 第36页 |
| ·Hana法制备感受态细胞 | 第36页 |
| ·转化 | 第36-37页 |
| ·酶切验证 | 第37页 |
| ·可能致病因子的诱导表达 | 第37-40页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的分离及纯化 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第38-40页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第40页 |
| ·重组蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| ·溶血性鉴定 | 第40-42页 |
| ·天然产物的溶血性鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的溶血性鉴定 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-61页 |
| ·海洋细菌多样性分析 | 第42-52页 |
| ·细菌的分离 | 第42-43页 |
| ·细菌的基因组及16S rRNA分析 | 第43-44页 |
| ·16SrRNA测序比对结果 | 第44-49页 |
| ·海洋细菌的分布 | 第49-50页 |
| ·构建系统发育树 | 第50-52页 |
| ·表达载体的构建 | 第52-58页 |
| ·基因组DNA提取和hly A基因扩增 | 第53-54页 |
| ·质粒的提取 | 第54-55页 |
| ·载体及目的基因双酶切 | 第55-56页 |
| ·重组质粒的转化 | 第56-57页 |
| ·重组质粒验证 | 第57-58页 |
| ·蛋白的表达 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第59页 |
| ·毒性鉴定 | 第59-61页 |
| ·天然产物的毒性鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白的毒性鉴定 | 第60-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-65页 |
| ·海洋沉积物中多样性分析 | 第61-62页 |
| ·可能致病因子的表达分析 | 第62-63页 |
| ·结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
