| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 第一部分：Rack1 基因表达稳定上调小鼠肝癌淋巴道转移Hca-P 细胞株的构建及鉴定 | 第18-37页 |
| （一） 前言 | 第18-19页 |
| （二） 材料和方法 | 第19-27页 |
| 1．材料 | 第19-20页 |
| ·动物和细胞系 | 第19页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第19-20页 |
| 2. 方法 | 第20-27页 |
| ·载体构建与验证 | 第20-23页 |
| ·Hca-P 细胞培养及转染 | 第23-25页 |
| ·荧光实时定量 PCR 检测 Rack1 基因的表达 | 第25-26页 |
| ·Western blot 检测 Rack1 蛋白的表达 | 第26-27页 |
| ·统计学处理 | 第27页 |
| （三） 结果 | 第27-31页 |
| 1. 载体构建验证 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的测序结果 | 第27页 |
| ·Rack1 基因序列 | 第27-28页 |
| 2. 荧光显微镜下绿色荧光蛋白的表达 | 第28-29页 |
| 3. 稳定转染细胞中 Rack1 基因在 mRNA 水平的表达 | 第29-30页 |
| 4. 稳定转染细胞中 Rack1 基因在蛋白水平的表达 | 第30-31页 |
| （四） 讨论 | 第31-33页 |
| （五） 参考文献 | 第33-36页 |
| （六） 结论 | 第36-37页 |
| 第二部分：Rack1 基因表达上调对小鼠肝癌淋巴道转移细胞株体外增殖、迁移和侵袭能力的影响 | 第37-51页 |
| （一） 前言 | 第37-38页 |
| （二） 材料与方法 | 第38-40页 |
| 1．材料 | 第38页 |
| ·动物和细胞系 | 第38页 |
| ·主要材料 | 第38页 |
| 2. 方法 | 第38-40页 |
| ·CCK8 法检测稳定转染后 Hca-P 细胞增殖能力 | 第38-39页 |
| ·Transwell小室检测稳定转染后Hca-P细胞迁移能力 | 第39页 |
| ·Transwell小室检测稳定转染后Hca-P细胞侵袭能力 | 第39页 |
| ·统计学处理 | 第39-40页 |
| （三） 结果 | 第40-42页 |
| 1. Rack1 基因表达上调对 Hca-P 细胞增殖能力的影响 | 第40页 |
| 2. Rack1 基因表达上调对 Hca-P 细胞迁移能力的影响 | 第40-41页 |
| 3. Rack1 基因表达上调对 Hca-P 细胞侵袭能力的影响 | 第41-42页 |
| （四） 讨论 | 第42-46页 |
| （五） 参考文献 | 第46-50页 |
| （六） 结论 | 第50-51页 |
| 第三部分：Rack1 基因表达上调对淋巴道转移相关蛋白表达的影响 | 第51-65页 |
| （一） 前言 | 第51-52页 |
| （二） 材料与方法 | 第52-56页 |
| 1．材料 | 第52-54页 |
| ·动物和细胞系 | 第52页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第52-53页 |
| ·主要溶液配制 | 第53-54页 |
| 2. 方法 | 第54-56页 |
| ·蛋白提取及定量 | 第54-55页 |
| ·Western blot 步骤 | 第55-56页 |
| ·统计学处理 | 第56页 |
| （三） 结果 | 第56-58页 |
| （四） 讨论 | 第58-60页 |
| （五） 参考文献 | 第60-64页 |
| （六） 结论 | 第64-65页 |
| 第四部分：PI3K 抑制剂对 Rack1 基因上调后淋巴道转移细胞生物学行为及肿瘤转移相关蛋白表达的影响 | 第65-78页 |
| （一） 前言 | 第65-66页 |
| （二） 材料与方法 | 第66-68页 |
| 1．材料 | 第66页 |
| ·动物和细胞系 | 第66页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第66页 |
| ·主要溶液配制 | 第66页 |
| 2. 方法 | 第66-68页 |
| ·细胞培养 | 第66页 |
| ·Western blot 步骤 | 第66页 |
| ·CCK8 检测 LY294002 对 Hca-P 细胞增殖能力的影响 | 第66-67页 |
| ·Transwell小室检测LY294002对Hca-P细胞迁移能力58 | 第67页 |
| ·Transwell小室检测LY294002对Hca-P细胞侵袭能力58 | 第67页 |
| ·统计学处理 | 第67-68页 |
| （三） 结果 | 第68-72页 |
| 1. LY294002 干预对 Hca-P 细胞增殖能力的影响 | 第68页 |
| 2. LY294002 干预对 Hca-P 细胞迁移能力和侵袭能力的影响 | 第68-70页 |
| 3. LY294002 干预对 Hca-P 细胞 Rac1、Gsn 和 Jnk1 表达影响 | 第70-71页 |
| 4. NSC33766 对 Hca-P 细胞中 Gsn 表达的影响 | 第71-72页 |
| （四） 讨论 | 第72-74页 |
| （五） 参考文献 | 第74-77页 |
| （六） 结论 | 第77-78页 |
| 综述 | 第78-90页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 附录 | 第90-91页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
