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EARLI1亚家族基因AT4G12490对拟南芥成花转变的调节功能及其编码蛋白的抑菌活性研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-8页
目录第8-12页
第一章 文献综述第12-24页
   ·拟南芥开花调控网络研究进展第12-18页
     ·光周期途径(Photoperiod Pathway)第14-15页
     ·春化作用途径(Vernalization Pathway)第15-16页
     ·自主途径(Autonomous Pathway)第16-17页
     ·赤霉素途径(Gibberellin pathway)第17页
     ·环境温度途径(Ambient Temperature Pathway)第17页
     ·年龄途径(Age Pathway)第17-18页
   ·植物脂质转移蛋白第18-21页
     ·植物脂质转移蛋白的基本特征第18-19页
     ·植物LTP基因的克隆鉴定第19页
     ·植物脂质转移蛋白的亚细胞定位第19页
     ·植物脂质转移蛋白的生物学功能第19-21页
   ·EARLI1亚家族基因研究进展第21-22页
   ·本研究的目的、内容和意义第22-24页
第二章 AT4G12490过表达、RNA干扰、突变体株系的制备第24-51页
   ·材料和主要试剂第24-26页
     ·植物材料的培养及生长条件第24页
     ·宿主菌和质粒载体第24页
     ·主要试剂和溶液的配制第24-26页
     ·主要仪器第26页
   ·载体构建和遗传转化第26-40页
     ·基因组DNA的提取第26-27页
     ·AT4G12490-PRD RNA干扰载体的构建第27-33页
     ·AT4G12490-8CM RNA干扰载体的构建第33页
     ·AT4G12490过表达载体的构建第33-35页
     ·35S::AT4G12490-GFP融合表达载体的构建第35-37页
     ·重组质粒的农杆菌转化第37-38页
     ·拟南芥遗传转化第38-39页
     ·转基因拟南芥植株的筛选与鉴定第39-40页
   ·纯合T-DNA插入突变体的筛选第40-41页
   ·结果与分析第41-50页
     ·AT4G12490-PRD和AT4G12490-8CM RNA干扰载体的构建第41-45页
     ·AT4G12490过表达载体的构建第45-46页
     ·35S::AT4G12490-GFP融合表达载体的构建第46-48页
     ·转基因拟南芥植株的筛选与鉴定第48-49页
     ·SK24076 T-DNA插入纯合突变体的鉴定第49-50页
   ·讨论第50-51页
第三章 拟南芥AT4G12490基因与开花诱导途径的关系第51-78页
   ·材料第51-53页
     ·植物材料的处理第51页
     ·Northern-blotting相关试剂第51-53页
     ·主要仪器与设备第53页
   ·方法第53-61页
     ·Northern印迹杂交第53-56页
     ·sqRT-PCR分析第56-60页
     ·赤霉素含量的高效液相色谱(HPLC)测定第60-61页
   ·结果第61-76页
     ·8CM RNA干扰植株具有早花表型第61-62页
     ·不同组织中AT4G12490基因与开花基因的表达特征第62-63页
     ·不同发育阶段AT4G12490基因与开花基因的表达特征第63-66页
     ·不同光周期条件下野生型植株和8CM RNA干扰植株中开花基因的表达情况第66-69页
     ·AT4G12490和开花基因在野生型植株和RNA干扰植株中的昼夜表达规律第69-72页
     ·AT4G12490基因与春化作用途径的相关性分析第72-74页
     ·AT4G12490基因与赤霉素途径的相关性分析第74-76页
   ·讨论第76-78页
     ·AT4G12490等EARLI1亚家族基因能够维持拟南芥营养生长第76页
     ·AT4G12490基因与拟南芥开花途径的关系第76-78页
第四章 AT4G12490基因表达产物的亚细胞定位第78-87页
   ·材料与培养基第78页
     ·实验材料第78页
     ·培养基第78页
     ·主要仪器与设备第78页
   ·方法第78-80页
     ·AT4G12490烟草转基因植株的再生第78-79页
     ·转基因烟草的PCR检测第79页
     ·转移基因表达的sqRT-PCR分析第79-80页
     ·AT4G12490蛋白的亚细胞定位第80页
   ·实验结果与分析第80-86页
     ·转基因烟草植株的再生和分子鉴定第80-81页
     ·转基因烟草的开花时间延迟第81-82页
     ·转基因烟草植株的PCR鉴定第82-83页
     ·转基因烟草的SqRT-PCR分析第83页
     ·AT4G12490蛋白的亚细胞定位第83-86页
   ·讨论第86-87页
第五章 拟南芥AT4G12490基因编码蛋白的抑菌活性第87-102页
   ·材料第87-89页
     ·植物材料第87页
     ·质粒和菌株第87页
     ·主要试剂第87-89页
     ·主要仪器第89页
   ·方法第89-95页
     ·引物的设计与合成第89-90页
     ·拟南芥基因组DNA的提取第90页
     ·AT4G12490基因的扩增第90页
     ·原核表达载体的构建第90-92页
     ·AT4G12490蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中的表达第92-93页
     ·融合蛋白的纯化第93页
     ·重组蛋白的抑菌活性分析第93-94页
     ·AT4G12490蛋白的体内抑菌活性分析第94-95页
   ·结果与分析第95-100页
     ·AT4G12490基因的克隆第95页
     ·重组质粒pHTb-90的鉴定第95-96页
     ·重组蛋白的表达与纯化第96-98页
     ·AT4G12490重组蛋白的抑菌活性第98-99页
     ·在细胞内表达AT4G12490基因对酵母菌生长的抑制作用第99-100页
   ·讨论第100-102页
全文总结第102-104页
参考文献第104-119页
攻读博士学位期间取得的科研成果第119-120页
致谢第120页

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