| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-43页 |
| 第一节 中国小麦花叶病毒的研究进展 | 第17-24页 |
| 1 中国小麦花叶病毒的分布、症状、防治及侵染循环 | 第17-18页 |
| ·中国小麦花叶病毒的分布、田间症状及防治 | 第17页 |
| ·中国小麦花叶病毒的侵染循环 | 第17-18页 |
| 2 CWMV分子生物学特性 | 第18-22页 |
| ·CWMV RNA1、RNA2基因组结构 | 第18-19页 |
| ·CWMV编码蛋白 | 第19-22页 |
| ·RNA复制复合体 | 第19-21页 |
| ·运动蛋白 | 第21页 |
| ·外壳蛋白及外壳蛋白通读蛋白 | 第21-22页 |
| ·19 kDa富含半胱氨酸蛋白 | 第22页 |
| 3 结语 | 第22-24页 |
| 第二节 植物RNA病毒侵染性cDNA克隆的研究进展 | 第24-32页 |
| 1 侵染性cDNA克隆 | 第24页 |
| 2 侵染性cDNA克隆在病毒学上的应用 | 第24-25页 |
| 3 侵染性克隆的种类 | 第25-26页 |
| 4 侵染性cDNA克隆的构建策略 | 第26-27页 |
| 5 影响转录物侵染性的因素 | 第27-29页 |
| ·基因突变对转录物侵染性的影响 | 第27页 |
| ·转录物异质性的影响 | 第27页 |
| ·5’端和3’端非病毒核苷酸对转录物侵染性的影响 | 第27-28页 |
| ·构建侵染性克隆所选载体的影响 | 第28-29页 |
| ·宿主菌对质粒的影响 | 第29页 |
| 6 侵染性克隆的接种方法 | 第29页 |
| 7 侵染性cDNA克隆的应用 | 第29-31页 |
| ·病毒基因功能的研究 | 第30页 |
| ·RNA病毒作为载体表达外源基因编码的蛋白 | 第30-31页 |
| 8 结语 | 第31-32页 |
| 第三节 植物病毒运动蛋白的分子生物学研究进展 | 第32-43页 |
| 1 运动蛋白的分类 | 第32-35页 |
| 2 调节病毒运动的细胞结构和细胞因子 | 第35-40页 |
| ·胞间连丝(PD) | 第35-36页 |
| ·内质网(ER) | 第36-38页 |
| ·细胞骨架(Cytoskeleton) | 第38-40页 |
| 3 研究MP功能的主要方法 | 第40-41页 |
| ·利用突变体研究MP的功能 | 第40页 |
| ·利用互补试验研究MP功能 | 第40-41页 |
| 4 结语 | 第41-43页 |
| 第二章 中国小麦花叶病毒(CWMV)侵染性CDNA克隆的构建 | 第43-60页 |
| 1 材料与方法 | 第43-51页 |
| ·病毒来源和植物材料 | 第43页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第43页 |
| ·分子生物学试剂及抗体 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·CWMV粒子的提纯与电子显微镜观察 | 第44页 |
| ·小麦叶片总RNA的提取 | 第44-46页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第46页 |
| ·PCR反应 | 第46页 |
| ·常规PCR反应 | 第46页 |
| ·Over-lap PCR反应 | 第46页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第46-47页 |
| ·连接与转化 | 第47-48页 |
| ·菌落PCR筛选与测序 | 第48页 |
| ·重组质粒的提取与酶切鉴定 | 第48页 |
| ·体外转录反应 | 第48-49页 |
| ·体外转录产物接种 | 第49页 |
| ·拟南芥原生质体的制备 | 第49页 |
| ·PEG介导原生质体转化 | 第49-50页 |
| ·ELISA检测 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot分析 | 第50-51页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第50页 |
| ·Western blot分析 | 第50-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-57页 |
| ·病毒粒子提纯 | 第51页 |
| ·CWMV RNA1、RNA2各个片段的RT-PCR扩增及亚克隆构建 | 第51-52页 |
| ·CWMV RNA1、RNA2 cDNA的片段序列分析 | 第52页 |
| ·T7启动子控制下的CWMV RNA1、RNA2全长cDNA克隆的构建 | 第52-53页 |
| ·体外转录 | 第53-54页 |
| ·CWMV体外转录物侵染活性验证 | 第54-56页 |
| ·体外转录物转染拟南芥原生质体 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| 第三章 CWMV 37K基因在大肠杆菌中的表达及其37K蛋白抗血清的制备 | 第60-68页 |
| 1 材料与方法 | 第60-62页 |
| ·病毒来源 | 第60页 |
| ·菌株、载体和抗体 | 第60页 |
| ·基因的克隆和载体的构建 | 第60-61页 |
| ·诱导表达 | 第61页 |
| ·大量表达产物的纯化 | 第61-62页 |
| ·CWMV 37K蛋白抗血清的制备 | 第62页 |
| ·应用CWMV 37K蛋白抗血清检测感病小麦叶片中的CWMV | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-66页 |
| ·CWMV RNA1编码的37K基因的克隆 | 第62-63页 |
| ·RNA1编码的37K基因的序列分析 | 第63页 |
| ·利用原核表达载体在大肠杆菌中表达融合蛋白 | 第63-64页 |
| ·37K蛋白纯化和抗血清的制备 | 第64-65页 |
| ·应用CWMV 37K蛋白制备的抗血清检测感病小麦中的CWMV | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 CWMV 37K蛋白在植物细胞中的定位及其运动功能分析 | 第68-96页 |
| 1 材料与方法 | 第68-73页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·质粒和菌株 | 第68-69页 |
| ·试剂与仪器 | 第69页 |
| ·载体构建 | 第69-72页 |
| ·农杆菌(C58C1)介导的重组表达载体瞬时表达 | 第72页 |
| ·电击法导入农杆菌 | 第72页 |
| ·农杆菌浸润 | 第72页 |
| ·抑制剂处理及质壁分离 | 第72-73页 |
| ·烟草细胞膜蛋白提取及Western blot分析 | 第73页 |
| ·共聚焦荧光显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM) | 第73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-92页 |
| ·CWMV 37K在烟草细胞中互补运动缺陷型载体 | 第73-76页 |
| ·eGFP、eGFP-37K和37K-eGFP在烟草表皮细胞中的表达 | 第76-83页 |
| ·37K与GFP的融合蛋白能在本氏烟叶片中细胞间运动 | 第76-78页 |
| ·37K在本氏烟叶片细胞中定位在胞间连丝 | 第78-81页 |
| ·37K在本氏烟叶片细胞中形成的蛋白颗粒运动方式 | 第81-83页 |
| ·37K利用分泌途径和肌动球蛋白动力系统定位和运输到胞间连丝 | 第83-86页 |
| ·CWMV 37K的跨膜结构域支持其运动功能 | 第86-92页 |
| ·CWMV 37K的跨膜结构及保守区域的预测 | 第87页 |
| ·CWMV 37K表达蛋白为细胞膜结合蛋白 | 第87-89页 |
| ·TM1和TM2是37K进行胞间运动和定位在胞间连丝上所必须的 | 第89-92页 |
| 3 讨论 | 第92-96页 |
| 第五章 CWMV 37K蛋白与果胶甲基酯酶互作的研究 | 第96-107页 |
| 1 材料与方法 | 第97-100页 |
| ·植物材料 | 第97页 |
| ·质粒和菌株 | 第97页 |
| ·总RNA的提取 | 第97页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第97页 |
| ·常规PCR反应 | 第97页 |
| ·基因的克隆测序 | 第97-98页 |
| ·载体的构建 | 第98页 |
| ·酵母双杂交(Yeast two-hybrid system,YTHS) | 第98页 |
| ·双分子荧光互补(Bimolecular Fluorescence complementation,BiFC) | 第98-100页 |
| ·农杆菌转化和浸润本氏烟 | 第100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-105页 |
| ·PME基因的获得 | 第100-101页 |
| ·双分子荧光互补(BiFC)验证PME与37K蛋白互作 | 第101-102页 |
| ·酵母双杂交(YTHS)验证PME与37K蛋白的互作 | 第102-103页 |
| ·37K与PME互作区域的鉴定 | 第103-105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 第六章 全文结论与进一步研究建议 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-124页 |
| 附录A：本论文中所用术语缩写词及中英文对照 | 第124-127页 |
| 附录B：常用培养基及缓冲液配方 | 第127-133页 |
| 附录C：常用化学、分子生物学试剂和及仪器 | 第133页 |
