| 致谢 | 第1-8页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-14页 |
| Abstract | 第14-26页 |
| 第一章 文献综述 | 第26-38页 |
| 1 寄生蜂对寄主的生理调控 | 第26-27页 |
| ·寄生蜂对寄主发育的调控策略 | 第26页 |
| ·寄生蜂对寄主免疫的抑制策略 | 第26-27页 |
| 2 寄生蜂的寄生因子 | 第27-28页 |
| ·毒液蛋白及其功能 | 第27页 |
| ·多分DNA病毒及其功能 | 第27-28页 |
| 3 畸形细胞概述 | 第28-32页 |
| ·畸形细胞的起源 | 第28-29页 |
| ·畸形细胞在寄主体内的发育 | 第29-30页 |
| ·畸形细胞的形态 | 第30-31页 |
| ·畸形细胞的体外培养 | 第31-32页 |
| 4 畸形细胞的功能 | 第32-36页 |
| ·畸形细胞为寄生蜂幼虫提供营养 | 第33-34页 |
| ·畸形细胞调控寄主幼虫的发育 | 第34-36页 |
| ·畸形细胞抑制寄主的免疫系统 | 第36页 |
| 5 高通量测序技术在基因组学研究中的应用 | 第36-37页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 第二章 基本材料与方法 | 第38-50页 |
| 1 昆虫饲养相关设备 | 第38-39页 |
| ·全自动人工气候室 | 第38页 |
| ·日光蔬菜大棚 | 第38页 |
| ·智能人工气候箱 | 第38页 |
| ·养虫笼 | 第38-39页 |
| ·养蜂罐 | 第39页 |
| ·吸虫管 | 第39页 |
| ·养虫盒 | 第39页 |
| 2 供试材料 | 第39-40页 |
| ·小菜蛾Plutella xylostella-菜蛾盘绒茧蜂Cotesia vestalis系统 | 第39页 |
| ·供试蔬菜 | 第39-40页 |
| 3 供试昆虫的人工饲养 | 第40-41页 |
| ·虫源 | 第40页 |
| ·寄主昆虫的饲养 | 第40页 |
| ·寄生蜂的饲养 | 第40页 |
| ·寄生方法 | 第40-41页 |
| 4 常用试剂的配制 | 第41-44页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·Luria-Bertani(LB)培养基的制备 | 第41-42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂 | 第42页 |
| ·Western-blotting相关试剂 | 第42-43页 |
| ·十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)相关试剂 | 第43页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA)相关试剂 | 第43-44页 |
| 5 主要实验方法 | 第44-50页 |
| ·TRIzoL法提取总RNA | 第44-45页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第45页 |
| ·表达载体构建 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第46-47页 |
| ·Western-blotting印记分析 | 第47-48页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第48页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第48-49页 |
| ·荧光定量PCR | 第49-50页 |
| 第三章 菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞的发育和形态 | 第50-58页 |
| 1 材料与方法 | 第50-52页 |
| ·畸形细胞的获取 | 第50-51页 |
| ·畸形细胞的数量和直径动态 | 第51页 |
| ·畸形细胞光学显微镜观察 | 第51-52页 |
| ·畸形细胞的扫描电镜观察 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-56页 |
| ·畸形细胞的形成 | 第52-53页 |
| ·畸形细胞的数量级直径发育动态 | 第53-54页 |
| ·畸形细胞发育的光学显微镜观察 | 第54-55页 |
| ·畸形细胞发育的扫描电镜观察 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞转录组测序及功能注释 | 第58-74页 |
| 1 材料与方法 | 第58-61页 |
| ·畸形细胞的收集 | 第58页 |
| ·总RNA的提取 | 第58页 |
| ·转录组测序及序列拼装 | 第58-59页 |
| ·畸形细胞转录组的功能注释 | 第59页 |
| ·功能基因EST的验证 | 第59-61页 |
| 2 结果 | 第61-70页 |
| ·菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞收集及RNA抽提 | 第61-62页 |
| ·菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞转录组序列特征 | 第62-63页 |
| ·菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞转录组Nr功能注释 | 第63-65页 |
| ·菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞转录组GO及COG功能注释 | 第65-67页 |
| ·功能基因的鉴定 | 第67-69页 |
| ·功能基因EST的验证 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-74页 |
| 第五章 菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞数字基因表达谱测序及分析 | 第74-87页 |
| 1 材料与方法 | 第74-75页 |
| ·畸形细胞的收集 | 第74页 |
| ·总RNA的提取及测序文库构建 | 第74页 |
| ·数字基因表达谱(DGE)测序 | 第74页 |
| ·差异表达模式分析 | 第74-75页 |
| ·功能注释 | 第75页 |
| 2 结果 | 第75-85页 |
| ·菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞数字基因表达谱测序特征 | 第75-78页 |
| ·菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞数字基因表达谱功能注释 | 第78-79页 |
| ·菜蛾盘绒茧蜂畸形细胞数字基因表达谱表达模式的差异 | 第79-81页 |
| ·差异表达基因的功能注释 | 第81-82页 |
| ·功能基因的表达模式 | 第82-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 寄生蜂幼虫营养摄取相关基因的克隆和表达 | 第87-98页 |
| 1 材料与方法 | 第87-90页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因随发育阶段的表达规律 | 第87-89页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因的克隆 | 第89页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因的多重比对分析 | 第89页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因的原核表达 | 第89-90页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因的蛋白纯化和多克隆抗体制备 | 第90页 |
| 2 结果 | 第90-96页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因随发育阶段表达规律的分析 | 第90-91页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因的序列分析 | 第91-93页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因的氨基酸序列多重比对分析 | 第93-95页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因融合蛋白的诱导表达 | 第95页 |
| ·寄生蜂幼虫营养摄取相关基因融合蛋白的纯化及抗体制备 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96-98页 |
| 第七章 调控寄主发育相关基因的克隆和表达 | 第98-110页 |
| 1 材料与方法 | 第98-101页 |
| ·调控寄主发育相关基因随发育阶段的表达规律 | 第98-100页 |
| ·调控寄主发育相关基因的克隆 | 第100页 |
| ·调控寄主发育相关基因的多重比对分析 | 第100页 |
| ·调控寄主发育相关基因的原核表达 | 第100-101页 |
| ·调控寄主发育相关蛋白的纯化和多克隆抗体制备 | 第101页 |
| 2 结果 | 第101-108页 |
| ·调控寄主发育相关基因随发育阶段的表达规律 | 第101-102页 |
| ·调控寄主发育相关基因的克隆 | 第102-104页 |
| ·调控寄主发育相关基因的多重比对分析 | 第104-105页 |
| ·调控寄主发育相关基因的原核表达 | 第105-106页 |
| ·调控寄主发育相关蛋白多克隆抗体与毒液蛋白的免疫反应 | 第106-108页 |
| 3 讨论 | 第108-110页 |
| 第八章 抑制寄主免疫相关基因的克隆和表达 | 第110-125页 |
| 1 材料与方法 | 第110-113页 |
| ·抑制寄主免疫相关基因随发育阶段的表达规律 | 第110-111页 |
| ·抑制寄主免疫相关基因的克隆 | 第111-112页 |
| ·抑制寄主免疫相关基因的多重比对 | 第112页 |
| ·抑制寄主免疫相关基因的原核表达 | 第112-113页 |
| ·抑制寄主免疫相关蛋白的纯化和多克隆抗体制备 | 第113页 |
| ·TSVP-8对小菜蛾血淋巴黑化反应的抑制 | 第113页 |
| 2 结果 | 第113-123页 |
| ·畸形细胞抑制寄主免疫相关基因随发育阶段的表达规律 | 第113-114页 |
| ·畸形细胞抑制寄主免疫相关基因的克隆 | 第114-117页 |
| ·畸形细胞抑制寄主免疫相关基因多重比对分析 | 第117-119页 |
| ·畸形细胞抑制寄主免疫相关基因的原核表达 | 第119-121页 |
| ·抑制寄主免疫相关蛋白多克隆抗体与毒液蛋白的免疫反应 | 第121-122页 |
| ·畸形细胞表达蛋白对寄主体液免疫的抑制 | 第122-123页 |
| 3 讨论 | 第123-125页 |
| 第九章 毒素基因的克隆和表达 | 第125-134页 |
| 1 材料与方法 | 第125-128页 |
| ·毒素基因随发育阶段的表达规律 | 第125-126页 |
| ·毒素基因的克隆 | 第126-127页 |
| ·毒素基因的多重比对 | 第127页 |
| ·毒素基因的原核表达 | 第127页 |
| ·毒素蛋白的纯化和多克隆抗体制备 | 第127-128页 |
| 2 结果 | 第128-133页 |
| ·毒素基因随畸形细胞发育得的表达规律 | 第128页 |
| ·毒素类基因序列分析 | 第128-130页 |
| ·毒素基因与同源序列的多重比对分析 | 第130-131页 |
| ·毒素基因的体外诱导表达和western-blotting分析 | 第131页 |
| ·毒素多克隆抗体与菜蛾盘绒茧蜂毒液蛋白的免疫反应 | 第131-133页 |
| 3 讨论 | 第133-134页 |
| 总讨论 | 第134-138页 |
| 参考文献 | 第138-148页 |
