| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1. 前言 | 第11-23页 |
| ·植物器官大小的精确控制 | 第11页 |
| ·影响植物器官生长发育的相关基因和过程 | 第11-13页 |
| ·EBP1与植物器官的大小调节 | 第13-18页 |
| ·EBP1的结构特点及生物学性状 | 第13-16页 |
| ·EBP1对植物器官大小的调节 | 第16-18页 |
| ·EBP1与植物的抗逆性 | 第18-20页 |
| ·EBP1的磷酸化 | 第18-19页 |
| ·EBP1与植物的抗逆性 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第20-22页 |
| ·本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-44页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1基因的获得 | 第23页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1基因的原核表达 | 第23-30页 |
| ·表达载体的构建 | 第23-27页 |
| ·HbEBP1基因的扩增与酶切 | 第24-25页 |
| ·原核表达载体pGEX-6P-1的酶切与去磷酸化 | 第25页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第25-26页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第26-27页 |
| ·工程菌的表达 | 第27-30页 |
| ·工程菌BL21(DE3)感受态制备 | 第27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·工程菌BL21(DE3)的诱导表达 | 第27页 |
| ·重组蛋白GST-HbEBP1的SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白GST-HbEBP1的分离纯化 | 第28-29页 |
| ·HbEBP1蛋白的氨肽酶活性测定 | 第29-30页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1蛋白的亚细胞定位研究 | 第30-34页 |
| ·HbEBP1-eGFP融合蛋白表达载体构建 | 第30-33页 |
| ·HbEBP1基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·eGFP基因的扩增 | 第31页 |
| ·HbEBP1-eGFP的融合扩增 | 第31-33页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第33页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化和筛选 | 第33-34页 |
| ·转基因植株的EGFP观察 | 第34页 |
| ·不同处理下巴西橡胶树HbEBP1的表达谱分析 | 第34-40页 |
| ·植物材料的处理 | 第34-35页 |
| ·巴西橡胶树叶片总RNA的提取与质量检测 | 第35-36页 |
| ·RNA的杂交(Northern blot) | 第36-40页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1转化重组的拟南芥纯系筛选、转基因鉴定、表达鉴定及功能分析 | 第40-44页 |
| ·农杆菌介导的HbEBP1基因转化拟南芥和转基因植株的筛选 | 第40-41页 |
| ·农杆菌的转化、拟南芥的转化、T_1代种子的筛选 | 第40页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第40-41页 |
| ·纯系转基因植株的获得 | 第41页 |
| ·拟南芥植株的表达鉴定 | 第41-42页 |
| ·拟南芥植物材料的总RNA提取 | 第41-42页 |
| ·拟南芥植物材料的表达检测 | 第42页 |
| ·转基因植株的Southern杂交 | 第42-43页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第42页 |
| ·基因组的酶切消化 | 第42页 |
| ·DNA的印迹转移(Southern blot) | 第42-43页 |
| ·转基因拟南芥的表型及生理指标测定 | 第43-44页 |
| ·拟南芥植物材料叶片大小比较测定 | 第43页 |
| ·拟南芥干旱存活率测定 | 第43页 |
| ·拟南芥相对存活率测定 | 第43页 |
| ·拟南芥冷冻存活率测定 | 第43-44页 |
| 3. 结果与分析 | 第44-65页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1的生物信息学分析 | 第44-51页 |
| ·HbEBP1的基因序列及其ORF区预测 | 第44页 |
| ·HbEBP1蛋白质特性分析 | 第44-46页 |
| ·信号肽、疏水性及跨膜区预测 | 第46-49页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第49页 |
| ·HbEBP1同源性分析 | 第49-51页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1的原核表达 | 第51-53页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第51页 |
| ·原核表达产物的分析 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白的Map活性测定 | 第52-53页 |
| ·HbEBP1对细菌抗冷性的影响 | 第53页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1蛋白的亚细胞定位研究 | 第53-55页 |
| ·HbEBP1、eGFP的扩增及融合扩增 | 第53-54页 |
| ·含重组质粒阳性菌的鉴定 | 第54-55页 |
| ·HbEBP1-eGFP融合蛋白的亚细胞定位观察 | 第55页 |
| ·不同处理下巴西橡胶树HbEBP1的表达谱分析 | 第55-57页 |
| ·巴西橡胶树叶片总RNA提取与质量检测 | 第56页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1在不同处理下的表达谱分析 | 第56-57页 |
| ·巴西橡胶树HbEBP1转化拟南芥的纯系筛选及HbEBP1的表达分析与功能鉴定 | 第57-65页 |
| ·拟南芥转化苗的纯系筛选 | 第57-58页 |
| ·拟南芥转基因植株的表达分析 | 第58-59页 |
| ·拟南芥总RNA的质量检测 | 第58-59页 |
| ·HbEBP1基因在拟南芥中的表达分析 | 第59页 |
| ·拟南芥转基因植株的Southern鉴定 | 第59-61页 |
| ·拟南芥DNA的提取和检测 | 第59页 |
| ·拟南芥的Southern杂交 | 第59-61页 |
| ·转基因拟南芥的生理指标测定 | 第61-65页 |
| ·拟南芥转基因植株叶面积测定 | 第61-63页 |
| ·拟南芥转基因植株的抗旱能力测定 | 第63页 |
| ·拟南芥转基因植株的抗寒能力测定 | 第63-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-69页 |
| ·关于HbEBP1中的氨肽酶活性的探讨 | 第65-66页 |
| ·关于HbEBP1的亚细胞定位的探讨 | 第66-67页 |
| ·关于HbEBP1使植物速生、器官增大的探讨 | 第67页 |
| ·关于HbEBP1的表达模式的探讨 | 第67-68页 |
| ·关于HbEBP1的抗逆功能探讨 | 第68-69页 |
| 5. 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 缩略词 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
