| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-31页 |
| 1 食源性致病菌及其流行现状 | 第15-17页 |
| ·食品安全 | 第15-16页 |
| ·食源性疾病 | 第16页 |
| ·食源性疾病的流行情况 | 第16-17页 |
| ·食源性致病菌检测现状 | 第17页 |
| 2 本研究所涉及的食源性致病菌及其危害 | 第17-22页 |
| ·空肠弯曲杆菌 | 第17-18页 |
| ·副溶血弧菌 | 第18-19页 |
| ·小肠结肠炎耶尔森菌 | 第19-20页 |
| ·阪崎肠杆菌 | 第20-21页 |
| ·产气荚膜梭菌 | 第21-22页 |
| ·奇异变形杆菌 | 第22页 |
| 3 食源性致病菌快速检测方法 | 第22-29页 |
| ·传统检测方法 | 第23页 |
| ·免疫学方法 | 第23-25页 |
| ·酶联免疫吸附(ELISA)检测 | 第23-24页 |
| ·免疫荧光技术（IFT） | 第24页 |
| ·乳胶凝集试验（RPLA） | 第24页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第24-25页 |
| ·免疫磁珠分离技术 | 第25页 |
| ·免疫印迹法 | 第25页 |
| ·生物传感技术 | 第25-26页 |
| ·分子生物学技术 | 第26-27页 |
| ·基因芯片技术 | 第26页 |
| ·核酸探针技术 | 第26-27页 |
| ·PCR 技术 | 第27-29页 |
| ·实时荧光定量 PCR 技术 | 第27-28页 |
| ·常规 PCR 检测技术 | 第28页 |
| ·多重 PCR 检测技术 | 第28-29页 |
| 4 肉、乳及乳制品中食源性致病菌检测研究现状 | 第29-30页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第30-31页 |
| 引言 | 第31-32页 |
| 1 材料 | 第32-37页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·主要培养基 | 第32-35页 |
| ·主要试剂及其配方 | 第35-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-67页 |
| ·六种食源性致病菌的培养、分离和鉴定 | 第37-55页 |
| ·空肠弯曲杆菌的培养、分离和鉴定 | 第38-41页 |
| ·副溶血弧菌的 、分离和鉴定 | 第41-46页 |
| ·小肠结肠炎耶尔森菌的培养、分离和鉴定 | 第46-48页 |
| ·阪崎肠杆菌的培养、分离和鉴定 | 第48-50页 |
| ·产气荚膜梭菌的培养、分离和鉴定 | 第50-53页 |
| ·奇异变形杆菌的培养、分离和鉴定 | 第53-55页 |
| ·致病菌 DNA 提取方法 | 第55-58页 |
| ·煮沸法 | 第55页 |
| ·CTAB/NaCl 法 | 第55-56页 |
| ·苯酚-氯仿法 | 第56页 |
| ·蛋白酶 K 法 | 第56-57页 |
| ·试剂盒法 | 第57页 |
| ·chelex-100 法 | 第57-58页 |
| ·FTA 滤膜法 | 第58页 |
| ·破碎法 | 第58页 |
| ·食源性致病菌 DNA 的验证 | 第58页 |
| ·目的基因的选择及引物设计 | 第58-59页 |
| ·阳性模板的制备 | 第59-63页 |
| ·单重 PCR 反应体系的建立 | 第59页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第59页 |
| ·PCR 产物的纯化及回收 | 第59-60页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第60-61页 |
| ·PCR 产物与载体连接 | 第61页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第61页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第61-62页 |
| ·序列测定 | 第62-63页 |
| ·质粒的定量 | 第63页 |
| ·单重 PCR 特异性和灵敏度 | 第63-64页 |
| ·特异性测定 | 第63页 |
| ·灵敏度测定 | 第63-64页 |
| ·多重 PCR 扩增条件的优化 | 第64页 |
| ·多重 PCR 的特异性检测 | 第64-65页 |
| ·空肠弯曲杆菌、副溶血弧菌、耶尔森菌三重 PCR 反应的特异性 | 第64-65页 |
| ·阪崎肠杆菌、产气荚膜梭菌、奇异变形杆菌三重 PCR 反应的特异性 | 第65页 |
| ·多重 PCR 的灵敏度检测 | 第65页 |
| ·模拟样品检测 | 第65页 |
| ·试剂盒的研制及其稳定性、重复性和保存期试验 | 第65-66页 |
| ·山东泰安地区该六种致病菌流行情况监测调查 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-82页 |
| ·DNA 模板的提取方法的比较 | 第67页 |
| ·多重 PCR 引物设计结果 | 第67-68页 |
| ·单重 PCR 特异性和灵敏度分析 | 第68-71页 |
| ·单重 PCR 特异性的测定结果 | 第68-70页 |
| ·单重 PCR 灵敏度的测定结果 | 第70-71页 |
| ·多重 PCR 反应优化结果 | 第71-72页 |
| ·多重 PCR 体系特异性检测结果 | 第72-74页 |
| ·多重 PCR 反应的灵敏度 | 第74-77页 |
| ·人工污染模型样品检测结果 | 第77-79页 |
| ·试剂盒的研制及其稳定性、重复性和保存期试验 | 第79-80页 |
| ·试剂盒的组装 | 第79页 |
| ·试剂盒稳定性、重复性和保质期试验结果 | 第79-80页 |
| ·山东泰安地区该 6 种致病菌流行情况监测结果 | 第80-82页 |
| ·禽类样品检测结果 | 第80-81页 |
| ·乳及乳制品检测结果 | 第81-82页 |
| ·与国标检测方法比较 | 第82页 |
| 4 讨论 | 第82-88页 |
| ·多重 PCR 的影响因素 | 第83-86页 |
| ·引物浓度与引物比例 | 第83-84页 |
| ·引物 Tm 值的影响 | 第84页 |
| ·Taq 酶、dNTP 和 Mg~(2+)浓度 | 第84-85页 |
| ·多重 PCR 反应条件的优化——正交试验 | 第85页 |
| ·多重 PCR 的特异性和灵敏度 | 第85-86页 |
| ·多重 PCR 反应污染的防控 | 第86页 |
| ·泰安地区样品检测 | 第86-87页 |
| ·与国标检测方法比较 | 第87页 |
| ·展望 | 第87-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间论文发表情况 | 第100页 |