| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-28页 |
| ·牛结核病的流行现状及危害 | 第16-17页 |
| ·牛结核病的发现及病原 | 第17-18页 |
| ·牛结核病的流行病学 | 第18-19页 |
| ·临床症状 | 第19页 |
| ·免疫与发病机理 | 第19-20页 |
| ·机体抗牛分枝杆菌感染的免疫机理 | 第20-21页 |
| ·牛结核病的诊断 | 第21-28页 |
| ·牛结核病诊断抗原的研究 | 第21-23页 |
| ·牛结核病诊断方法的研究 | 第23-28页 |
| 2 研究目的与意义 | 第28-30页 |
| 3 材料与方法 | 第30-49页 |
| ·试验材料 | 第30-35页 |
| ·质粒及菌株 | 第30-31页 |
| ·血清及抗原蛋白 | 第31页 |
| ·主要试剂及材料 | 第31-32页 |
| ·质粒抽提与鉴定试剂的配制 | 第32页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液的配制 | 第32-33页 |
| ·克隆表达融合蛋白其它试剂的配制 | 第33-34页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第34页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第34-35页 |
| ·牛分枝杆菌抗原RV3872、RV3872-CFP-10-ESAT-6融合基因的克隆表达方法 | 第35-43页 |
| ·PCR扩增RV3872基因 | 第35页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第35-36页 |
| ·连接pMD19-T Vector | 第36页 |
| ·PCR鉴定pMD19-T Vector | 第36-37页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第37页 |
| ·质粒的转化 | 第37-38页 |
| ·质粒的制备 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET28aVR3872-CFP-10-ESAT-6的构建 | 第39-41页 |
| ·重组质粒的诱导表达、SDS-PAGE分析和重组蛋白质的纯化 | 第41-43页 |
| ·融合蛋白的性质分析 | 第43页 |
| ·胶体金免疫层析方法的建立 | 第43-49页 |
| ·CFP10-ESAT-6-胶体金复合物制备及纯化 | 第43-44页 |
| ·质控线兔抗CE蛋白IgG的制备与提纯 | 第44-45页 |
| ·免疫层析法的建立 | 第45-48页 |
| ·试纸条稳定性试验制备 | 第48-49页 |
| 4 结果与分析 | 第49-69页 |
| ·牛分枝杆菌抗原RV3872、和RV3872-CFP-10-ESAT-6的融合基因的克隆表达结果 | 第49-53页 |
| ·RV3872的PCR产物和目的基因片段的酶切回收产物 | 第49-50页 |
| ·重组质粒和pET28aRV3872-CFP-10-ESAT-6的鉴定 | 第50-51页 |
| ·目的基因片段的序列分析 | 第51页 |
| ·诱导表达重组蛋白及其纯化 | 第51-53页 |
| ·融合蛋白的热稳定性分析 | 第53页 |
| ·牛结核病胶体金免疫层析方法建立结果 | 第53-69页 |
| ·胶体金的制备 | 第53-54页 |
| ·最适标记胶体金pH值的确定 | 第54-55页 |
| ·最适标记抗原量的确定 | 第55-56页 |
| ·质控线兔抗CE蛋白IgG提纯 | 第56页 |
| ·检测线抗原和质控线IgG最佳包被浓度的确定 | 第56-57页 |
| ·试纸条结果 | 第57-58页 |
| ·试纸条特异性试验 | 第58-59页 |
| ·试纸条敏感性试验 | 第59-60页 |
| ·与韩国进口试纸条比较试验 | 第60-61页 |
| ·梅花鹿结核特异性抗体ELISA检测方法的建立 | 第61页 |
| ·MPB70-83试纸条与MPB-83-ELISA的比较试验 | 第61-62页 |
| ·CE试纸条与CE-ELISA的比较试验 | 第62-63页 |
| ·CE试纸条与MPB70-83试纸条的比较试验 | 第63-64页 |
| ·CE-ELISA与83-ELISA的比较试验 | 第64-65页 |
| ·四种抗原试纸条与ELISA联合检测结果的比较分析 | 第65-66页 |
| ·不同抗原ELISA的比较试验 | 第66-67页 |
| ·83-ELISA联合CE-ELISA与70-83-CE-ELISA的比较试验 | 第67-68页 |
| ·试纸条稳定性试验 | 第68-69页 |
| 5 讨论 | 第69-73页 |
| ·融合蛋白的克隆表达及特性探讨 | 第69-70页 |
| ·融合蛋白克隆表达 | 第69-70页 |
| ·融合蛋白特性分析 | 第70页 |
| ·胶体金免疫层析方法的建立与应用探讨 | 第70-73页 |
| ·间接法和夹心法的选择 | 第70-71页 |
| ·抗原蛋白的选择 | 第71页 |
| ·材料和试剂的选择 | 第71页 |
| ·胶体金免疫层析方法的建立 | 第71-72页 |
| ·胶体金免疫层析方法的应用 | 第72页 |
| ·检测结果分析 | 第72-73页 |
| 6 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
