| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-33页 |
| 1.1 能源问题综述 | 第13-21页 |
| 1.1.1 世界能源概况 | 第13-14页 |
| 1.1.2 生物能源概况 | 第14-16页 |
| 1.1.3 藻类生物能源概况 | 第16-18页 |
| 1.1.4 藻类培养概况 | 第18-19页 |
| 1.1.5 藻类油脂提取概况 | 第19-20页 |
| 1.1.6 藻类油脂分析概况 | 第20-21页 |
| 1.2 藻类基因工程综述 | 第21-27页 |
| 1.2.1 基因工程技术概况 | 第21-22页 |
| 1.2.2 植物转基因技术概况 | 第22-23页 |
| 1.2.3 农杆菌介导法概况 | 第23-27页 |
| 1.3 莱茵衣藻研究综述 | 第27-30页 |
| 1.3.1 莱茵衣藻概况 | 第27-28页 |
| 1.3.2 莱茵衣藻油脂代谢研究概况 | 第28-29页 |
| 1.3.3 莱茵衣藻油脂代谢中gpd1基因的研究概况 | 第29-30页 |
| 1.4 选题目的和研究内容 | 第30-33页 |
| 1.4.1 选题目的 | 第30页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第30-33页 |
| 第二章 莱茵衣藻的培养 | 第33-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-35页 |
| 2.1.1 藻株 | 第33页 |
| 2.1.2 培养基 | 第33-35页 |
| 2.1.2.1 TAP培养基配制 | 第33-34页 |
| 2.1.2.2 SE培养基配制 | 第34-35页 |
| 2.1.2.3 BG-11培养基配制: | 第35页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 2.2.1 莱茵衣藻培养基的选择 | 第35页 |
| 2.2.2 莱茵衣藻培养条件的优化 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 2.3.1 莱茵衣藻培养基的选择 | 第36-37页 |
| 2.3.2 莱茵衣藻培养条件的优化 | 第37-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 莱茵衣藻表达载体构建 | 第41-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 菌株 | 第41页 |
| 3.1.2 培养基 | 第41-42页 |
| 3.1.2.1 YPD培养基配制 | 第41页 |
| 3.1.2.2 LB培养基配制 | 第41页 |
| 3.1.2.2 YEB培养基配制 | 第41-42页 |
| 3.1.3 试剂 | 第42页 |
| 3.1.4 仪器 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-53页 |
| 3.2.1 载体构建中常用方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1.1 菌株培养方法 | 第42-43页 |
| 3.2.1.2 酵母菌基因组DNA提取方法 | 第43页 |
| 3.2.1.3 质粒DNA提取方法 | 第43页 |
| 3.2.1.4 农杆菌LBA4404感受态制备方法 | 第43页 |
| 3.2.1.5 农杆菌LBA4404的冻融转化法 | 第43-44页 |
| 3.2.1.6 冻融法制备大肠杆菌DH5α感受态方法 | 第44页 |
| 3.2.1.7 质粒转化感受态大肠杆菌DH5α方法 | 第44页 |
| 3.2.1.8 细胞低温保存方法 | 第44页 |
| 3.2.2 莱茵衣藻表达载体的构建 | 第44-53页 |
| 3.2.2.1 目的基因的获取 | 第45-50页 |
| 3.2.2.2 载体质粒的获取及验证 | 第50-51页 |
| 3.2.2.3 克隆载体的构建及验证 | 第51-52页 |
| 3.2.2.4 中间载体的构建及验证 | 第52页 |
| 3.2.2.5 表达载体的构建及验证 | 第52-53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-57页 |
| 3.3.1 目的基因的获取 | 第53-54页 |
| 3.3.2 载体质粒的获取和验证 | 第54-55页 |
| 3.3.3 克隆载体的构建与验证 | 第55页 |
| 3.3.4 中间载体的构建与验证 | 第55-56页 |
| 3.3.5 表达载体的构建与验证 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 农杆菌介导莱茵衣藻转化 | 第59-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 菌株、藻株 | 第59页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第59-60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-66页 |
| 4.2.1 FACHB-479的博莱霉素(Zeocin)筛选浓度确定 | 第60页 |
| 4.2.2 农杆菌介导转化FACHB-479细胞 | 第60页 |
| 4.2.3 阳性转化藻株的筛选 | 第60页 |
| 4.2.4 gpd1基因转化藻株的分子生物学验证 | 第60-66页 |
| 4.2.4.1 gpd1基因转化藻株的基因组DNA提取 | 第60-61页 |
| 4.2.4.2 gpd1基因转化藻株的PCR检测 | 第61-62页 |
| 4.2.4.3 Trizo1试剂法提取莱茵衣藻总RNA | 第62-63页 |
| 4.2.4.4 总RNA的纯化 | 第63-64页 |
| 4.2.4.5 反转录合成cDNA的第一条链 | 第64-65页 |
| 4.2.4.6 gpd1基因转化藻株的反转录PCR(RT-PCR)检测 | 第65-66页 |
| 4.3 结果与分析 | 第66-68页 |
| 4.3.1 检测FACHB-479的博莱霉素(Zeocin)筛选浓度确定 | 第66页 |
| 4.3.2 农杆菌介导转化FACHB-479细胞及阳性转化藻株的筛选 | 第66-67页 |
| 4.3.3 gpd1基因转化藻株的分子生物学验证 | 第67-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 转基因莱茵衣藻的油脂 | 第71-77页 |
| 5.1 实验材料 | 第71页 |
| 5.1.1 菌株、藻株 | 第71页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第71页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第71页 |
| 5.2 实验方法 | 第71-73页 |
| 5.2.1 尼罗红染色液配制 | 第71页 |
| 5.2.2 尼罗红染色法优化 | 第71-72页 |
| 5.2.3 转gpd1基因莱茵衣藻藻株的油脂检测 | 第72页 |
| 5.2.4 统计分析 | 第72-73页 |
| 5.3 结果与分析 | 第73-74页 |
| 5.3.1 尼罗红染色法优化 | 第73页 |
| 5.3.2 转gpd1基因莱茵衣藻藻株的油脂检测 | 第73-74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-77页 |
| 论文主要结论、创新点与展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第94-95页 |
