| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-39页 |
| 1. 研究问题的由来 | 第12-13页 |
| 2. 真核生物启动子概述 | 第13-18页 |
| ·核心启动子 | 第14-18页 |
| ·上游(或下游)顺式作用元件 | 第18页 |
| 3. 高等植物启动子领域的研究现状分析 | 第18-34页 |
| ·高等植物启动子研究现状之一(侧重实际运用方面) | 第18-22页 |
| ·指导转基因育种 | 第19-20页 |
| ·构建特殊系统 | 第20-22页 |
| ·高等植物启动子研究现状之二(侧重理论研究方面) | 第22-34页 |
| ·启动子特征描述 | 第23-32页 |
| ·组成型启动子 | 第23-24页 |
| ·诱导型启动子 | 第24-27页 |
| ·组织器官特异启动子 | 第27-31页 |
| ·特殊类型启动子 | 第31-32页 |
| ·转录调控机理研究 | 第32-33页 |
| ·表征相应基因功能 | 第33-34页 |
| 4. 启动子功能研究的技术与方法概述 | 第34-38页 |
| ·启动子的生物信息学分析 | 第35页 |
| ·启动子分离克隆 | 第35-36页 |
| ·常用的启动子表达模式及表达强度分析方法 | 第36页 |
| ·常用的启动子顺式作用元件及反式作用因子分析鉴定方法 | 第36-38页 |
| ·缺失分析 | 第36-37页 |
| ·凝胶阻滞试验 | 第37页 |
| ·酵母单杂交技术 | 第37-38页 |
| ·定点突变分析 | 第38页 |
| 5. 本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 胚乳特异表达启动子EnP2的分离克隆 | 第39-51页 |
| 1. 试验材料 | 第39-40页 |
| ·水稻品种 | 第39页 |
| ·载体及菌株 | 第39页 |
| ·候选基因En2的基本信息 | 第39-40页 |
| 2. 试验方法 | 第40-45页 |
| ·明恢63基因组DNA及不同组织RNA的抽提及反转录 | 第40页 |
| ·启动子克隆载体DX2181及其衍生载体的构建 | 第40-41页 |
| ·候选基因En2的表达模式鉴定 | 第41页 |
| ·启动子EnP2的分离克隆及序列分析 | 第41-42页 |
| ·启动子EnP2及其系列缺失的表达载体构建及遗传转化 | 第42-43页 |
| ·T_0代转基因植株的PCR阳性检测 | 第43-44页 |
| ·组织化学染色及GUS活性定量检测 | 第44-45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-51页 |
| ·启动子克隆载体DX2181及其衍生载体的构建 | 第45-46页 |
| ·候选基因En2的表达模式鉴定 | 第46-47页 |
| ·启动子EnP2的分离克隆及序列分析 | 第47页 |
| ·组织化学染色分析EnP2及相应缺失片段的表达模式 | 第47-49页 |
| ·启动子EnP2及相应缺失片段胚乳组织GUS活性定量测定 | 第49-51页 |
| 第三章 胚乳特异表达启动子EnP3的分离克隆 | 第51-61页 |
| 1. 试验材料 | 第51-52页 |
| ·水稻品种 | 第51页 |
| ·载体及菌株 | 第51页 |
| ·候选基因En3的基本信息 | 第51-52页 |
| 2. 试验方法 | 第52-55页 |
| ·明恢63基因组DNA及不同组织RNA的抽提及反转录 | 第52页 |
| ·候选基因En3的表达模式鉴定 | 第52页 |
| ·启动子EnP3的分离克隆及序列分析 | 第52页 |
| ·启动子EnP3及其系列缺失的表达载体构建及遗传转化 | 第52-53页 |
| ·定点突变试验 | 第53-54页 |
| ·T_0代转基因植株的PCR阳性检测 | 第54-55页 |
| ·组织化学染色及GUS活性定量检测 | 第55页 |
| 3. 结果与分析 | 第55-61页 |
| ·候选基因En3的表达模式鉴定 | 第55页 |
| ·启动子EnP3的分离克隆及序列分析 | 第55-56页 |
| ·组织化学染色分析EnP3及相应缺失片段的表达模式 | 第56-57页 |
| ·启动子EnP3及相应缺失片段胚乳组织GUS活性定量测定 | 第57-58页 |
| ·启动子EnP3-292中保守功能元件突变分析 | 第58-61页 |
| 第四章 绿色组织特异表达启动子P_(DX1)的分离克隆 | 第61-81页 |
| 1. 试验材料 | 第61页 |
| ·水稻品种 | 第61页 |
| ·载体及菌株 | 第61页 |
| ·候选基因DX1的基本信息 | 第61页 |
| 2. 试验方法 | 第61-71页 |
| ·明恢63基因组DNA及不同组织RNA的抽提及反转录 | 第61-62页 |
| ·候选基因DX1的表达模式鉴定 | 第62页 |
| ·启动子P_(DX1)的分离克隆及序列分析 | 第62页 |
| ·启动子P_(DX1)及其系列缺失的表达载体构建及遗传转化 | 第62-64页 |
| ·凝胶阻滞试验 | 第64页 |
| ·定点突变试验 | 第64-65页 |
| ·T_0代转基因植株的PCR阳性检测 | 第65页 |
| ·组织化学染色及GUS活性定量检测 | 第65-71页 |
| 3. 结果与分析 | 第71-81页 |
| ·候选基因DX1的表达模式鉴定 | 第71页 |
| ·启动子P_(DX1)的分离克隆及序列分析 | 第71-72页 |
| ·缺失分析鉴定控制P_(DX1)表达模式及表达量的关键区域 | 第72-75页 |
| ·绿色组织特异表达调控元件的鉴定 | 第75-77页 |
| ·GSE1和GSE2作为正向调控元件来影响基因表达 | 第77-81页 |
| 第五章 利用rbcs基因启动子来培育胚乳无Cry1C~*蛋白的抗虫转基因水稻 | 第81-93页 |
| 1. 前言 | 第81-83页 |
| 2. 研究的目的与意义 | 第83页 |
| 3. 材料与方法 | 第83-86页 |
| ·试验材料 | 第83-84页 |
| ·水稻材料 | 第83-84页 |
| ·供试昆虫 | 第84页 |
| ·试验方法 | 第84-86页 |
| ·转基因植株的Southern blotting检测 | 第84页 |
| ·目标转基因纯合阳性株系的筛选 | 第84-85页 |
| ·转基因纯合株系的田间抗性评价 | 第85页 |
| ·转基因纯合株系农艺性状考查 | 第85页 |
| ·转基因植株Cry1C~*蛋白含量的测定 | 第85-86页 |
| 4. 结果与分析 | 第86-93页 |
| ·转基因植株的Southern blotting检测 | 第86页 |
| ·目标转基因纯合阳性株系的筛选 | 第86-87页 |
| ·目标转基因纯合阳性株系的田间抗性评价 | 第87-88页 |
| ·目标转基因纯合阳性株系的农艺性状考察 | 第88-91页 |
| ·目标转基因纯合阳性株系Cry1C~*蛋白含量的测定 | 第91-93页 |
| 第六章 讨论 | 第93-99页 |
| 1. 载体DX2181及其衍生载体在水稻启动子克隆中的应用 | 第93页 |
| 2. 胚乳特异表达启动子EnP2有望用于转基因育种 | 第93-94页 |
| 3. 从胚乳特异表达启动子EnP3的研究来看转录调控的复杂性 | 第94页 |
| 4. GSE1及GSE2是新的绿色组织特异表达相关元件 | 第94-96页 |
| 5. DXl基因的第一外显子及第一内含子对P_(DX1)在绿色组织的表达有很重要的调控作用 | 第96-98页 |
| 6. 转基因抗虫水稻株系RJ5具有很好的应用前景 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-125页 |
| 附录1 启动子EnP2的核苷酸序列 | 第125-126页 |
| 附录2 启动子EnP3的核苷酸序列 | 第126-127页 |
| 附录3 启动子P_(DX1)的核苷酸序列 | 第127-129页 |
| 附录4 个人简历 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
