| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-43页 |
| ·四吡咯生物合成代谢途径综述 | 第13-20页 |
| ·四吡咯生物合成代谢途径的酶促反应步骤 | 第13-14页 |
| ·四吡咯生物合成代谢途径的调控 | 第14-16页 |
| ·四吡咯中间代谢产物介导的叶绿体到细胞核反向信号传导 | 第16-20页 |
| ·叶绿素是光合自养生物中最重要的四吡咯化合物之一 | 第20-24页 |
| ·镁离子螯合酶是叶绿素合成的关键调控酶 | 第24-27页 |
| ·镁离子螯合酶是由I、D和H三个亚基组成的异源聚合酶 | 第24-26页 |
| ·镁离子螫合酶的催化机制分为两个步骤 | 第26-27页 |
| ·镁离子螯合酶活性调控的研究 | 第27-31页 |
| ·CHLI、CHLD和CHLH基因表达的调控 | 第28页 |
| ·镁离子螯合酶活性受昼夜节律的调节 | 第28-29页 |
| ·镁离子螫合酶活性受叶绿体中氧化还原状态的调控 | 第29-30页 |
| ·镁离子螫合酶活性受调控蛋白GUN4的调节 | 第30-31页 |
| ·镁离子螯合酶各亚基之间的相互联系和影响 | 第31-32页 |
| ·镁离子螯合酶参与的其它生物代谢途径 | 第32-34页 |
| ·病毒介导的基因沉默技术是反向遗传学研究的重要工具 | 第34-41页 |
| ·VIGS技术的原理 | 第34-35页 |
| ·VIGS技术的发展 | 第35-39页 |
| ·VIGS技术的优缺点 | 第39-40页 |
| ·VIGS技术在豌豆反向遗传学研究中的应用 | 第40-41页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第41-43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-63页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·豌豆材料 | 第43页 |
| ·菌株 | 第43-44页 |
| ·载体的构建 | 第44-46页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第44页 |
| ·酵母双杂交载体的构建 | 第44-45页 |
| ·BiFC载体的构建 | 第45页 |
| ·VIGS载体的构建 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白原核表达和纯化 | 第46-48页 |
| ·6×His标签融合蛋白的原核表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·谷胱甘肽转移酶(GST)标签融合蛋白的原核表达与纯化 | 第47-48页 |
| ·GST pull-down实验 | 第48页 |
| ·镁离子螫合酶活性和ATPase活性的测定 | 第48-52页 |
| ·镁离子螫合酶活性的测定 | 第48-50页 |
| ·ATP酶活性的测定 | 第50-52页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第52页 |
| ·双分子荧光互补实验 | 第52-53页 |
| ·豌豆VIGS实验 | 第53页 |
| ·豌豆VIGS植株叶片中各种生理生化指标的测定 | 第53-56页 |
| ·色素含量的测定 | 第53-54页 |
| ·血红素含量的测定 | 第54页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸合成速率的测定 | 第54-55页 |
| ·光合作用相关参数F_v/F_m的测定 | 第55页 |
| ·叶片中活性氧物质的测定 | 第55-56页 |
| ·叶片中抗氧化酶活性的检测 | 第56页 |
| ·豌豆VIGS植株叶片的代谢组学分析 | 第56页 |
| ·豌豆VIGS植株叶片中基因表达分析 | 第56-58页 |
| ·转录水平分析 | 第56-57页 |
| ·蛋白质水平分析 | 第57-58页 |
| ·镁离子螯合酶Ⅰ亚基在体内的氧化还原状态分析 | 第58-59页 |
| ·显微镜分析 | 第59-60页 |
| ·共聚焦激光显微镜分析 | 第59页 |
| ·透射电子显微镜分析 | 第59页 |
| ·荧光显微镜分析 | 第59-60页 |
| ·PsCHLI基因拷贝数分析 | 第60-62页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第60-61页 |
| ·Southern-blot分析 | 第61-62页 |
| ·序列分析 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-111页 |
| ·豌豆镁离子螯合酶Ⅰ亚基结构和功能分析 | 第63-73页 |
| ·豌豆镁离子螯合酶Ⅰ亚基cDNA和氨基酸序列分析 | 第63-69页 |
| ·PsCHLI中负责相互作用和酶活性的功能域 | 第69-73页 |
| ·病毒介导的豌豆PsCHLI和PsCHLD基因沉默植株的研究 | 第73-94页 |
| ·PsCHLI和PsCHLD基因沉默植株呈现黄化表型 | 第73-76页 |
| ·VIGS-CHLI和VIGS-CHLD植株叶片中生理生化指标的变化 | 第76-79页 |
| ·VIGS植株叶片中叶绿体结构和功能的变化 | 第79-85页 |
| ·VIGS植株叶片中活性氧物质积累情况 | 第85-88页 |
| ·VIGS植株叶片代谢组学分析 | 第88-90页 |
| ·VIGS植株叶片中光合作用相关的核基因表达变化 | 第90-94页 |
| ·叶绿体硫氧还蛋白对镁离子螫合酶活性调控的研究 | 第94-111页 |
| ·CHLI、CHLD、CHLH和GUN4与TRX-F相互作用的研究 | 第94-97页 |
| ·PsTRXF对PsCHLI的体外ATP酶活性以及重组的镁离子螯合酶活性的影响 | 第97-99页 |
| ·病毒介导的PsTRXs基因沉默植株表型研究 | 第99-102页 |
| ·VIGS植株叶片中PsCHLI氧化还原状态的研究 | 第102-105页 |
| ·VIGS-TRX植株叶片中生理生化指标的变化 | 第105-108页 |
| ·VIGS-TRX植株叶片中PhANGs的表达情况 | 第108-111页 |
| 4 讨论 | 第111-122页 |
| ·镁离子螯合酶活性降低引起植株生理生化以及叶绿体结构和功能等多效性变化 | 第111-112页 |
| ·镁离子螯合酶参与协调叶绿体和线粒体中代谢途径间的相互作用 | 第112-113页 |
| ·镁离子螯合酶活性降低导致细胞内ROS的积累 | 第113页 |
| ·CHLD反馈调控PhANGs的转录 | 第113-114页 |
| ·镁离子螯合酶参与调控光合作用相关蛋白在体内的稳定性 | 第114-115页 |
| ·PsTRX-F在体外对PsCHLI的ATP酶活性和重组镁离子螯合酶活性具有促进作用 | 第115页 |
| ·叶绿体TRX在体内调控CHLI的氧化还原状态以及镁离子螫合酶活性 | 第115-117页 |
| ·TRX-F和TRX-M参与调控四吡咯生物合成代谢途径 | 第117-118页 |
| ·TRX-F和TRX-M参与调控PhANGs的转录 | 第118页 |
| ·总结 | 第118-122页 |
| 参考文献 | 第122-139页 |
| 附录 | 第139-157页 |
| 附录A 部分实验的操作流程 | 第139-151页 |
| 附录B 附表 | 第151-155页 |
| 附录C 简历及攻读期成果 | 第155-157页 |
| 致谢 | 第157页 |
