| Ⅰ 主要英文缩写表 | 第1-7页 |
| Ⅱ 中英文摘要 | 第7-15页 |
| Ⅲ 前言 | 第15-18页 |
| Ⅳ 材料与方法 | 第18-34页 |
| 一 试剂与材料 | 第18-23页 |
| 二 实验方法 | 第23-34页 |
| 1 PCR | 第23-25页 |
| ·RT-PCR | 第23-24页 |
| ·缺失突变PCR | 第24-25页 |
| ·点突变PCR | 第25页 |
| 2 质粒的小量抽提 | 第25-26页 |
| 3 质粒的大量抽提 | 第26-27页 |
| 4 感受态的制备 | 第27页 |
| 5 质粒转化 | 第27-28页 |
| 6 质粒DNA的酶切与连接 | 第28页 |
| 7 DNA片段的回收 | 第28页 |
| 8 蛋白表达、纯化和复性 | 第28-29页 |
| 9 PC12细胞的培养、存活及分化检测 | 第29-30页 |
| 10 蛋白的进化分析和突变设计 | 第30页 |
| 11 脂质体法转染DNA | 第30-31页 |
| 12 免疫细胞荧光染色 | 第31页 |
| 13 Western-Blot | 第31-32页 |
| 14 免疫共沉淀 | 第32-34页 |
| Ⅴ 结果 | 第34-77页 |
| 一、 GFRα1 cDNA的克隆、表达与活性测定 | 第34-41页 |
| 1 GFRα1 cDNA的获得 | 第34-36页 |
| 2 GFRα1表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3 GFRα1诱导表达、纯化及复性 | 第37-39页 |
| 4 重组GFRα1的活性检测 | 第39-41页 |
| 二、 GDNF的表达及对PC12-基因工程细胞的影响 | 第41-44页 |
| 1 GDNF的表达、纯化及复性 | 第41-42页 |
| 2 PC12-基因工程细胞的构建 | 第42页 |
| 3 GDNF对PC12-基因工程细胞的影响 | 第42-44页 |
| 三、 GFRα1结构与功能研究 | 第44-55页 |
| 1 GFRαs家族的进化分析和突变设计 | 第44-48页 |
| 2 GFRα1缺失突变载体的构建 | 第48-55页 |
| ·缺失突变区域的选定 | 第48-49页 |
| ·缺失突变体及表达载体的制备 | 第49-50页 |
| ·GFRα1缺失突变体的诱导表达、纯化及复性 | 第50-51页 |
| ·GFRα1缺失突变体蛋白对PC12细胞的影响 | 第51-55页 |
| 四、 GFRα1与GDNF结合并起生物学活性的关键位点研究#(?) | 第55-77页 |
| 1 GFRα1中突变点的选定 | 第55-56页 |
| 2 GFRα1中点突变体引物 | 第56-58页 |
| 3 点突变体真核表达载体的制备 | 第58-60页 |
| 4 PC12-GFRα1点突变体基因工程细胞的构建 | 第60页 |
| 5 GDNF对GFRα1突变体基因工程细胞PC12-GFRα1Mn-RET的影响 | 第60-65页 |
| 6 GFRα1及其各突变体GFRα1Mn基因在PC12细胞中的表达检测 | 第65-70页 |
| ·PC12基因工程细胞的RT-PCR检测 | 第65-66页 |
| ·PC12基因工程细胞的Western-Blot检测 | 第66-67页 |
| ·免疫细胞荧光染色 | 第67-70页 |
| 7 GDNF-GFRα1-Ret相互作用及蛋白磷酸化检测 | 第70-77页 |
| Ⅵ 讨论 | 第77-87页 |
| Ⅶ 结论 | 第87-88页 |
| Ⅷ 参考文献 | 第88-94页 |
| Ⅸ 综述 | 第94-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 发表文章 | 第121-138页 |
