| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| ·溶菌酶概述 | 第14页 |
| ·溶菌酶的类型 | 第14-15页 |
| ·c 型溶菌酶结构 | 第15页 |
| ·溶菌酶抗菌谱 | 第15-16页 |
| ·溶菌酶催化反应机制及稳定条件 | 第16-17页 |
| ·溶菌酶的应用 | 第17页 |
| ·国内外溶菌酶生产现状及存在问题 | 第17-18页 |
| ·家蚕核型多角体病毒（BmNPV）多角体蛋白概述 | 第18-20页 |
| ·昆虫溶菌酶的研究现状及认识 | 第20-21页 |
| ·实验方案和技术路线 | 第21-23页 |
| ·实验意义和内容 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 生物信息学分析 | 第23-30页 |
| ·生物信息学工具 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-28页 |
| ·BmLZM 的基因序列 | 第23-26页 |
| ·BmLZM 蛋白保守序列与活性位点的预测 | 第26页 |
| ·BmLZM 蛋白氨基酸同源性比较分析 | 第26-27页 |
| ·BmLZM 的蛋白结构预测 | 第27-28页 |
| ·BmLZM 蛋白的物种进化关系分析 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 BmLZM 基因的克隆、表达和纯化 | 第30-53页 |
| ·材料与试剂 | 第30-32页 |
| ·材料和载体 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·主要试剂的配置 | 第30-32页 |
| ·方法 | 第32-43页 |
| ·家蚕脂肪体组织总 RNA 的提取和 cDNA 的合成 | 第32-34页 |
| ·引物设计和目的基因的获得 | 第34-35页 |
| ·野生 BmNPV 病毒基因组的提取 | 第35页 |
| ·PCR 扩增 Polh 基因 | 第35-36页 |
| ·E.coli TG1、BL21(DE3)感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第36页 |
| ·PCR 产物 Polh 与表达载体 pET-28a 的双酶切 | 第36页 |
| ·PCR 产物 BmLZM 的双酶切 | 第36-37页 |
| ·酶切产物处理及回收 | 第37页 |
| ·Polh 与 pET-28a 连接反应 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37-38页 |
| ·重组质粒 pET-28a-Polh 的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组表达载体 pET-28a-Polh-Thb 的双酶切 | 第39页 |
| ·pET-28a-Polh-Thb 酶切产物回收及纯化 | 第39页 |
| ·BmLZM 与 pET-28a-Polh-Thb 连接反应 | 第39-40页 |
| ·BmLZM 与 pET-28a-Polh-Thb 连接产物的转化 | 第40页 |
| ·重组质粒 pET-28a-Polh-Thb-BmLZM 的筛选与鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒 pET-28a-Polh-Thb-BmLZM 的测序鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒 pET-28a-Polh-Thb-BmLZM 转 BL21 及鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达及最佳表达时间 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的大量表达及表达产物的存在形式 | 第42-43页 |
| ·调节蛋白缓冲液 pH 值及离心法纯化重组蛋白 | 第43页 |
| ·实验结果与分析 | 第43-51页 |
| ·BmLZM 基因的克隆结果 | 第43-44页 |
| ·野生 BmNPV 病毒基因组的提取 | 第44-45页 |
| ·Polh 基因的克隆结果 | 第45页 |
| ·重组质粒 pET-28a-Polh 的 PCR 和双酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·质粒中 pET-28a-Polh-BmLZM 的 PCR 和双酶切鉴定 | 第46-48页 |
| ·测序鉴定结果 | 第48页 |
| ·Polh-BmLZM 诱导表达及最佳表达时间 | 第48-49页 |
| ·表达产物的存在形式及融合蛋白的纯化 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 天然 Polyhedrin 的纯化及多克隆抗体制备 | 第53-63页 |
| ·材料与试剂 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·主要试剂的配置 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-57页 |
| ·天然 Polh 的初步纯化 | 第54-55页 |
| ·RESOURCE Q 进一步纯化 | 第55页 |
| ·HiPrep 26/10 脱盐柱纯化 | 第55页 |
| ·Polh 的多克隆抗体制备 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白的 Western Blot 检测 | 第56-57页 |
| ·实验结果与分析 | 第57-61页 |
| ·天然 Polh 的初步纯化结果 | 第57-58页 |
| ·RESOURCE Q 纯化结果 | 第58-59页 |
| ·HiPrep 26/10 Polh 纯化 | 第59-60页 |
| ·质谱分析 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白的 Western Blot 检测 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 目的蛋白 BmLZM 的回收与活性检测 | 第63-72页 |
| ·材料与试剂 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·主要试剂的配置 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| ·融合蛋白酶切前预处理 | 第64页 |
| ·Thrombin 酶切融合蛋白 | 第64-65页 |
| ·Thrombin 酶切后目的蛋白 BmLZM 的回收 | 第65页 |
| ·热激法活性检测 | 第65页 |
| ·琼脂扩散法活性检测 | 第65-66页 |
| ·比浊法酶活检测 | 第66页 |
| ·实验结果与分析 | 第66-70页 |
| ·融合蛋白酶切前预处理结果 | 第66-67页 |
| ·融合蛋白凝血酶酶切 | 第67-68页 |
| ·Thrombin 酶切后 BmLZM 蛋白的纯化 | 第68页 |
| ·热激法活性检测结果 | 第68-69页 |
| ·琼脂扩散法活性检测结果 | 第69页 |
| ·比浊法（溶壁微球菌）活性检测结果 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第六章 融合蛋白 Polh-BmLZM 悬滴结晶条件初步探索 | 第72-78页 |
| ·材料与试剂 | 第72页 |
| ·材料 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72页 |
| ·主要试剂的配制 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-75页 |
| ·原理 | 第72-73页 |
| ·盖玻片的硅化处理 | 第73页 |
| ·蛋白质的预处理 | 第73-74页 |
| ·晶体培养 | 第74-75页 |
| ·试验观测 | 第75页 |
| ·实验结果与分析 | 第75-76页 |
| ·融合蛋白 Polh-BmLZM 结晶条件初步探索结果 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
