| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.结核分枝杆菌 | 第14页 |
| ·结核分枝杆菌的起源 | 第14页 |
| ·结核分枝杆菌生物学的特征 | 第14页 |
| 2.结核病 | 第14-16页 |
| ·结核病的流行病学 | 第14-15页 |
| ·结核病发作机制 | 第15页 |
| ·结核病的免疫保护 | 第15-16页 |
| 3.结核病诊断 | 第16-19页 |
| ·结核病的传统诊断 | 第16页 |
| ·结核病的快速诊断的新方法 | 第16-17页 |
| ·结核病的血清诊断 | 第17-19页 |
| 4.PPE 蛋白家族 | 第19-24页 |
| ·结核分枝杆菌 PE 和 PPE 家族 | 第19-20页 |
| ·PPE 家族蛋白的系统进化分类 | 第20-21页 |
| ·国内外研究现状 | 第21-22页 |
| ·PPE 家族蛋白的免疫性 | 第22-24页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第24-26页 |
| 1.实验目的和意义 | 第24页 |
| 2.研究内容 | 第24-25页 |
| 3.实验流程 | 第25-26页 |
| 第三章 结核杆菌 PPE 蛋白家族成员基因的克隆 | 第26-37页 |
| 1 材料与试剂 | 第26-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·实验试剂与仪器设备 | 第26页 |
| ·自配试剂 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-34页 |
| ·引物的设计 | 第27-28页 |
| ·质粒提取 | 第28-29页 |
| ·PCR 扩增 | 第29页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第29-30页 |
| ·双酶切目的片段与表达载体并回收 | 第30-32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·E.coli DH5 感受态细胞的制备(CaCl2 法) | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32-33页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒转化 E.coli BL21(DE3) | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-35页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的 PCR 扩增和双酶切鉴定 | 第35页 |
| 4.讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 结核杆菌 PPE 蛋白家族基因的原核表达及融合蛋白纯化 | 第37-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第37-39页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·试剂和溶液配制 | 第37-39页 |
| 2 方法 | 第39-42页 |
| ·诱导表达 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第40页 |
| ·镍亲和柱纯化融合蛋白 | 第40-41页 |
| ·可溶性重组蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·包涵体的纯化及复性 | 第41页 |
| ·BCA 法测蛋白含量 | 第41-42页 |
| ·绘制标准曲线 | 第41页 |
| ·测定样品 | 第41-42页 |
| ·数据处理 | 第42页 |
| ·计算样品蛋白含量 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-49页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第42-48页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·融合蛋白的定量 | 第48-49页 |
| 4.讨论 | 第49-50页 |
| 第五章 重组 PPE 蛋白免疫原性的研究 | 第50-62页 |
| 1.材料和试剂 | 第50-51页 |
| ·临床血清标本 | 第50页 |
| ·ELISA 检测所用的材料、试剂和仪器 | 第50-51页 |
| 2.方法 | 第51-52页 |
| ·包被抗原质量浓度的确定血清稀释浓度的确定 | 第51页 |
| ·ELISA 检测重组抗原的血清学特性 | 第51-52页 |
| ·统计方法 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-60页 |
| ·ELISA 检测结核患者和健康人对照组血清 OD 值组间分析 | 第52-53页 |
| ·抗原的灵敏性和特异性 | 第53-59页 |
| ·ESAT-6(E.coli)和 ESAT-6(M.S)的比较 | 第59-60页 |
| 4.讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
