| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-43页 |
| 1.1 小鼠精子发生 | 第16-33页 |
| 1.1.1 小鼠精子发生的场所——睾丸 | 第16-17页 |
| 1.1.2 性别决定及睾丸的发育 | 第17-20页 |
| 1.1.3 原始生殖细胞的特化及迁移 | 第20-23页 |
| 1.1.4 生殖细胞的命运决定 | 第23-26页 |
| 1.1.5 出生后雄性生殖细胞的发育 | 第26-33页 |
| 1.2 Sertoli cells与精子发生 | 第33-39页 |
| 1.2.1 Sertoli cells的增殖 | 第34-35页 |
| 1.2.2 Sertoli cells的功能成熟 | 第35页 |
| 1.2.3 血睾屏障(BTB)的形成及功能 | 第35-36页 |
| 1.2.4 Sertoli cells的能量代谢 | 第36-38页 |
| 1.2.5 Sertoli cells的蛋白Marker | 第38-39页 |
| 1.3 条件性基因敲除技术 | 第39-43页 |
| 1.3.1 小鼠基因敲除技术概述 | 第39-41页 |
| 1.3.2 小鼠条件性基因敲除技术 | 第41页 |
| 1.3.3 条件性基因敲除技术的缺点 | 第41-43页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第43-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第43-57页 |
| 2.1.1 抗体 | 第43-44页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第44-47页 |
| 2.1.3 主要耗材 | 第47-48页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第48-50页 |
| 2.1.5 主要溶液配制 | 第50-53页 |
| 2.1.6 实验动物 | 第53-54页 |
| 2.1.7 引物序列 | 第54-57页 |
| 2.2 实验方法 | 第57-67页 |
| 2.2.1 小鼠睾丸组织固定 | 第57-58页 |
| 2.2.2 小鼠睾丸组织固定后脱水及石蜡包埋和切片 | 第58-59页 |
| 2.2.3 苏木素伊红(H&E)染色 | 第59-60页 |
| 2.2.4 石蜡切片免疫荧光染色 | 第60-61页 |
| 2.2.5 小鼠基因型鉴定 | 第61-62页 |
| 2.2.6 支持细胞分离 | 第62页 |
| 2.2.7 mRNA提取 | 第62-63页 |
| 2.2.8 反转录反应及实时荧光定量PCR(Real-Time qPCR) | 第63-65页 |
| 2.2.9 石蜡切片细胞凋亡TUNEL染色 | 第65-66页 |
| 2.2.10 血睾屏障(BTB)功能检测 | 第66-67页 |
| 第三章 Brg1在Sertoli cells中的功能研究 | 第67-85页 |
| 3.1 引言 | 第67-70页 |
| 3.2 实验结果 | 第70-83页 |
| 3.2.1 Brg1 在小鼠睾丸中的表达和定位 | 第70-71页 |
| 3.2.2 Brg1 条件性敲除小鼠的获得和敲除效率鉴定 | 第71-74页 |
| 3.2.3 小鼠睾丸部分Sertoli cells中 Brg1 的敲除对精子发生和生殖力没有影响 | 第74-77页 |
| 3.2.4 另一种Amh-Cre(EMMA ID:EM:00022)具有高效重组效率,能够完全敲除所有Sertoli cells中 Brg | 第77-78页 |
| 3.2.5 小鼠全部Sertoli cells中 Brg1 的特异性敲除对精子发生和生殖力没有影响 | 第78-81页 |
| 3.2.6 Sertoli cells中 Brg1 的敲除不影响其正常功能 | 第81-82页 |
| 3.2.7 Brg1 同源基因Brm可能对Sertoli cells中 Brg1 的敲除有代偿作用 | 第82-83页 |
| 3.3 讨论 | 第83-85页 |
| 3.3.1 不同品系的Amh-Cre小鼠具有不同的敲除效率 | 第83页 |
| 3.3.2 小鼠Sertoli cells中 Brg1和Brm可能同时发挥功能 | 第83-85页 |
| 第四章 Mfn1和Mfn2在Sertoli cells及生殖细胞中的功能研究 | 第85-123页 |
| 4.1 引言 | 第85-88页 |
| 4.2 实验结果 | 第88-120页 |
| 4.2.1 Mfn1和Mfn2 在小鼠睾丸中的表达 | 第88-89页 |
| 4.2.2 Sertoli cells中 Mfn1和Mfn2 特异性敲除在小鼠的获得 | 第89-90页 |
| 4.2.3 小鼠部分Sertoli cells中 Mfn1 的敲除对Sertoli cells功能及精子发生和小鼠生殖力没有影响 | 第90-92页 |
| 4.2.4 小鼠部分Sertoli cells中 Mfn2 的敲除对Sertoli cells功能及精子发生和小鼠生殖力没有影响 | 第92-93页 |
| 4.2.5 小鼠部分Sertoli cells中 Mfn1和Mfn2 双敲除导致小鼠不育 | 第93-94页 |
| 4.2.6 生殖细胞大量脱落和凋亡是导致小鼠不育的原因 | 第94-98页 |
| 4.2.7 Sertoli cell数量的减少和功能的异常导致生殖细胞发育异常、脱落和凋亡 | 第98-100页 |
| 4.2.8 获得全部Sertoli cells中 Mfn1和Mfn2 敲除小鼠的必要性 | 第100-103页 |
| 4.2.9 减数分裂后单倍体生殖细胞中Mfn1和Mfn2 敲除对精子发生影响的研究 | 第103-108页 |
| 4.2.10 Stra8-icre(Jax ID:008208)具有较低的敲除效率 | 第108-113页 |
| 4.2.11 一种高敲除效率Stra8-cre的鉴定 | 第113-114页 |
| 4.2.12 生殖细胞中Mfn1和Mfn2 的敲除引起减数分裂阻滞、细胞凋亡及精子发生失败 | 第114-119页 |
| 4.2.13 生殖细胞中Mfn1和Mfn2 可能具有自己独特而又互补的功能 | 第119-120页 |
| 4.3 讨论 | 第120-123页 |
| 4.3.1 再次证明不同品系的Amh-Cre小鼠具有不同的敲除效率 | 第120-121页 |
| 4.3.2 减数分裂后单倍体雄性生殖细胞中Mfn1和Mfn2 的功能仍需进一步阐明 | 第121页 |
| 4.3.3 重新评估利用Stra8-icre(JaxID:008208)进行相关研究的结果的必要性 | 第121-122页 |
| 4.3.4 雄性生殖细胞中Mfn1和Mfn2 对减数分裂的重要性存在差异,同时功能上又可以相互代偿 | 第122-123页 |
| 第五章 Nrf1在Sertoli cells中的功能研究 | 第123-136页 |
| 5.1 引言 | 第123-124页 |
| 5.2 实验结果 | 第124-134页 |
| 5.2.1 Nrf1 在小鼠睾丸中的表达和定位 | 第124-125页 |
| 5.2.2 Nrf1 条件性敲除在小鼠的获得 | 第125-127页 |
| 5.2.3 Amh-Cre未发挥功能的部分Sertoli cells能够支持正常的精子发生,小鼠生殖力未受影响 | 第127-130页 |
| 5.2.4 全部Sertoli cells中 Nrf1 的特异性敲除导致精子发生失败 | 第130-132页 |
| 5.2.5 Sertoli cells中 P53 的敲除不能rescue Nrf1 敲除后导致的精子发生失败 | 第132-134页 |
| 5.3 讨论 | 第134-136页 |
| 5.3.1 Amh-Cre(Jax ID:007915)和Amh-cre(EMMAID:EM:00022)两种不同的Cre小鼠对Sertoli cells中 Nrf1 敲除后产生完全不同的表型 | 第134页 |
| 5.3.2 Sertoli cells中 Nrf1 敲除后导致细胞迅速消失的机制需要进一步研究 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-165页 |
| 附录 缩略词表 | 第165-166页 |
| 致谢 | 第166-167页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第167-169页 |
| 附件 | 第169-172页 |
