| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1 绪论 | 第10-19页 |
| ·MAPK信号通路 | 第10-14页 |
| ·丝裂原活化蛋白激酶MAPK | 第10-11页 |
| ·p38 MAPK信号通路 | 第11-13页 |
| ·MKK6简介 | 第13-14页 |
| ·RNAi研究进展 | 第14-16页 |
| ·RNAi的发现 | 第14页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第14-15页 |
| ·RNAi的特点 | 第15页 |
| ·RNAi技术的应用 | 第15-16页 |
| ·慢病毒载体 | 第16-17页 |
| ·技术路线 | 第17-19页 |
| 2 慢病毒载体的构建及病毒包装 | 第19-33页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·配制试剂 | 第19页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第19-20页 |
| ·菌株及细胞株 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-25页 |
| ·MKK6 shRNA的设计及合成 | 第20-21页 |
| ·MKK6 RNAi双链的退火合成及检测 | 第21页 |
| ·pENTR~(TM)/H1/TO-MKK6入门载体的构建 | 第21-22页 |
| ·pLenti4/BLOCK-iT~(TM)-MKK6表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·乙醇沉淀纯化表达载体 | 第23-24页 |
| ·293FT细胞的培养 | 第24页 |
| ·慢病毒的包装 | 第24页 |
| ·慢病毒的收集 | 第24-25页 |
| ·LacZ阴性对照慢病毒的产生 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-30页 |
| ·RNAi双链的退火结果 | 第25-26页 |
| ·入门质粒的构建结果 | 第26-27页 |
| ·表达质粒的构建结果 | 第27-29页 |
| ·慢病毒的包装 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-33页 |
| 3 慢病毒的滴定及效果检测 | 第33-44页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·主要配置的试剂 | 第33-35页 |
| ·方法 | 第35-39页 |
| ·慢病毒的浓缩 | 第35页 |
| ·细胞培养 | 第35页 |
| ·确定细胞对Zeocin的敏感度 | 第35页 |
| ·慢病毒的滴定 | 第35-36页 |
| ·稳定整合慢病毒基因的Hela细胞系的建立 | 第36页 |
| ·细胞冻存 | 第36-37页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第37页 |
| ·蛋白定量 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE | 第37-38页 |
| ·Western Blot | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·细胞对Zeocin敏感性的确定 | 第39页 |
| ·MKK6慢病毒及LacZ慢病毒的滴定结果 | 第39-41页 |
| ·蛋白定量结果 | 第41-42页 |
| ·Western Blot检测MKK6的表达 | 第42页 |
| ·本章小结 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 | 第50-52页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |