| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| ·猪支原体肺炎与猪肺炎支原体 | 第14页 |
| ·猪支原体肺炎的流行病学特点 | 第14-15页 |
| ·猪肺炎支原体的致病机理 | 第15-16页 |
| ·猪肺炎支原体主要免疫原蛋白 | 第16-20页 |
| ·猪肺炎支原体的黏附因子 | 第16-18页 |
| ·P97 蛋白 | 第16-17页 |
| ·P102 蛋白 | 第17页 |
| ·P159 蛋白 | 第17-18页 |
| ·膜蛋白 | 第18-19页 |
| ·P46 蛋白 | 第18页 |
| ·P65 蛋白 | 第18-19页 |
| ·热休克蛋白 | 第19-20页 |
| ·Dnak | 第19页 |
| ·P74 蛋白 | 第19-20页 |
| ·细胞质蛋白 | 第20页 |
| ·P36 蛋白 | 第20页 |
| ·猪肺炎支原体疫苗研究概况 | 第20-22页 |
| ·国外常规疫苗概况 | 第20-21页 |
| ·国内常规疫苗概况 | 第21页 |
| ·基因工程疫苗 | 第21-22页 |
| ·黏附因子相关疫苗的研究 | 第21页 |
| ·DNA 疫苗 | 第21-22页 |
| ·核苷酸还原酶(NrdF)R2 亚基重组疫苗 | 第22页 |
| ·表达文库免疫(Expression library immunization) | 第22页 |
| ·肽疫苗 | 第22页 |
| ·腺病毒载体的发展与应用 | 第22-23页 |
| ·研究的目的、意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料和方法 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌株、质粒、细胞和实验动物 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要设备 | 第24-25页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-39页 |
| ·穿梭质粒pShuttle-CMV-P97 C 的构建 | 第27-31页 |
| ·菌株的复苏 | 第27-28页 |
| ·引物设计与合成 | 第28页 |
| ·PCR 反应及产物的纯化 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的双酶切与纯化 | 第29页 |
| ·穿梭载体pShuttle-CMV 的双酶切与纯化 | 第29页 |
| ·穿梭载体与目的片段的连接、转化 | 第29-30页 |
| ·质粒的提取及鉴定 | 第30-31页 |
| ·同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-P97 C | 第31-33页 |
| ·pShuttle-CMV-P97 C 的 Pme I 单酶切与纯化 | 第31页 |
| ·将线性化的pShuttle-CMV-P97 C 电转化到BJ5183-AD-1 感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·重组腺病毒质粒的的鉴定 | 第32页 |
| ·重组腺病毒质粒的扩增 | 第32-33页 |
| ·转染 AD-293 细胞包装重组腺病毒 | 第33-34页 |
| ·AD-293 细胞的培养 | 第33页 |
| ·pAd-P97 C 的 Pac I 单酶切与纯化 | 第33页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第33-34页 |
| ·重组腺病毒的收毒与传代 | 第34页 |
| ·重组腺病毒的噬斑挑取 | 第34页 |
| ·重组腺病毒的鉴定与纯化 | 第34-36页 |
| ·RT-PCR 检测目的基因的转录 | 第34-35页 |
| ·间接免疫荧光检测目的基因的表达 | 第35页 |
| ·Western-blot 检测 | 第35页 |
| ·重组腺病毒的大量扩增与纯化 | 第35-36页 |
| ·重组腺毒的滴度测定 | 第36页 |
| ·重组腺病毒的小鼠免疫及其免疫效果的评价 | 第36-39页 |
| ·间接 ELISA 抗原的准备 | 第36-37页 |
| ·小鼠免疫 | 第37页 |
| ·ELISA 试验 | 第37-38页 |
| ·脾淋巴细胞转化试验 | 第38-39页 |
| 第三章 实验结果 | 第39-45页 |
| ·重组穿梭质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·PCR 扩增和重组穿梭质粒的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重组穿梭质粒的PCR 验证 | 第39-40页 |
| ·同源重组腺病毒质粒pAd-P97 C 的鉴定 | 第40页 |
| ·rAd-P97 C 腺病毒的制备 | 第40页 |
| ·重组腺病毒中p97 C 基因转录、表达的鉴定 | 第40-42页 |
| ·RT-PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 | 第41页 |
| ·Western-blot 鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组腺病毒的纯化及、滴度测定 | 第42-43页 |
| ·P97 C-30a 的蛋白纯化 | 第43页 |
| ·动物免疫结果 | 第43-45页 |
| ·重组腺病毒免疫小鼠可产生特异性的 IgG 抗体 | 第43页 |
| ·滴鼻免疫可刺激小鼠产生特异性的粘膜免疫 | 第43-44页 |
| ·重组腺病毒不刺激小鼠产生特异的细胞免疫 | 第44-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-52页 |
| ·研制 Mhp 新型疫苗的意义 | 第45页 |
| ·重组腺病毒的构建 | 第45-47页 |
| ·P97 基因的选择 | 第45页 |
| ·C 末端基因的选择 | 第45-46页 |
| ·腺病毒载体的选择 | 第46页 |
| ·载体系统的选择 | 第46页 |
| ·穿梭载体的选择 | 第46-47页 |
| ·转染方法的选择 | 第47页 |
| ·重组腺病毒纯化方法的选择 | 第47页 |
| ·免疫及免疫评价方法 | 第47-48页 |
| ·动物实验结果分析 | 第48页 |
| ·实验过程中注意的事项 | 第48-52页 |
| ·电转化获得重组菌 | 第48-49页 |
| ·转染获得重组腺病毒 | 第49页 |
| ·噬斑挑取 | 第49页 |
| ·重组病毒的纯化 | 第49-50页 |
| ·RNA 的提取 | 第50页 |
| ·Western-blot 鉴定 | 第50页 |
| ·淋巴细胞增值试验 | 第50-52页 |
| 第五章 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60页 |
