| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| ·禽流感病毒简介 | 第14页 |
| ·AIV 的基因组结构 | 第14-15页 |
| ·聚合酶复合体的结构与功能 | 第15-18页 |
| ·PB1 亚单位的结构与功能 | 第15-16页 |
| ·PB2 亚单位的结构与功能 | 第16-17页 |
| ·PA 亚单位的结构与功能 | 第17-18页 |
| ·RNA 聚合酶3 个亚单位之间的作用方式 | 第18页 |
| ·AIV 的转录与复制 | 第18-19页 |
| ·转录复制过程中宿主因子的作用 | 第19-20页 |
| ·HPAI 的发生及其公共卫生意义 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 流感病毒RNA聚合酶多克隆抗体的制备 | 第22-40页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·病毒毒株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·载体和受体菌 | 第22页 |
| ·溶液配制 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-32页 |
| ·病毒RNA 提取 | 第24页 |
| ·病毒基因组的反转录 | 第24页 |
| ·反转录产物的PCR 反应 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第25页 |
| ·9 个PCR 胶回收产物的酶切与载体pET-32a 和载体pCAGGS 的酶切 | 第25-26页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第26页 |
| ·感受态细胞JM109 的制备 | 第26页 |
| ·质粒转化 | 第26页 |
| ·可疑重组质粒阳性菌的筛选及质粒快速提取 | 第26-27页 |
| ·疑阳性质粒的精提 | 第27页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·基因的序列测定 | 第28页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达与纯化 | 第28-29页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的大量制备 | 第30页 |
| ·重组蛋白的复性与浓缩 | 第30页 |
| ·免疫血清的制备 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白免疫活性鉴定 | 第31-32页 |
| ·免疫血清的效价测定 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-36页 |
| ·RT-PCR 扩增结果 | 第32页 |
| ·基因的克隆与鉴定 | 第32-33页 |
| ·阳性质粒的PCR 鉴定 | 第33-34页 |
| ·阳性质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·蛋白最佳表达条件的优化 | 第34页 |
| ·蛋白纯化 | 第34页 |
| ·原核表达产物鉴定 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 | 第34-36页 |
| ·免疫血清效价的检测 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-40页 |
| ·引物的设计及PCR 条件的优化 | 第36-37页 |
| ·表达载体的选择 | 第37页 |
| ·培养条件的优化 | 第37-38页 |
| ·菌体裂解方法的选择 | 第38页 |
| ·蛋白表达形式-包涵体 | 第38页 |
| ·抗血清制备前的准备 | 第38-39页 |
| ·抗血清的制备 | 第39-40页 |
| 第三章 流感病毒聚合酶亚单位在细胞内的分布情况 | 第40-48页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·病毒 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·引物 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·病毒RNA 的提取及反转录 | 第40页 |
| ·反转录产物的PCR 反应 | 第40-41页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第41页 |
| ·PCR 胶回收产物、载体pCAGGS 及EGFP 基因的酶切 | 第41页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第41-42页 |
| ·质粒转化和阳性质粒的提取 | 第42页 |
| ·可疑重组质粒的PCR 鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒的亚克隆 | 第42页 |
| ·转染 | 第42-43页 |
| ·间接免疫荧光法细胞定位 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第43页 |
| ·基因的克隆与鉴定 | 第43-44页 |
| ·细胞定位 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·EGFP 融合基因的插入 | 第46页 |
| ·二次重组质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·激光共聚焦显微镜 | 第47页 |
| ·细胞定位 | 第47-48页 |
| 第四章 聚合酶 PA和 PB1亚单位的单克隆抗体制备 | 第48-57页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·病毒毒株 | 第48页 |
| ·实验动物及细胞 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·仪器与耗材 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-53页 |
| ·抗原的制备 | 第48页 |
| ·小鼠免疫 | 第48页 |
| ·间接ELISA 检测方法的建立 | 第48-49页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第49-50页 |
| ·杂交瘤细胞的选择性培养及单克隆抗体的筛选检测 | 第50页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第50-51页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第51页 |
| ·腹水中单抗效价和杂交瘤细胞培养上清的测定 | 第51页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第51页 |
| ·间接免疫荧光实验（IFA） | 第51-52页 |
| ·抗体亚类的测定 | 第52页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体分析 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-55页 |
| ·抗原的制备 | 第53页 |
| ·ELISA 筛选方法的建立 | 第53页 |
| ·细胞融合与筛选 | 第53页 |
| ·针对病毒PA-1、PA-2、PB1-1 蛋白单克隆抗体细胞株的建立 | 第53页 |
| ·单抗效价的测定 | 第53-54页 |
| ·针对病毒PA-1、PA-2、PB1-1 蛋白单克隆抗体细胞株的建立 | 第54页 |
| ·单抗的抗体亚类鉴定 | 第54页 |
| ·间接免疫荧光（IFA） | 第54页 |
| ·杂交瘤细胞染色体分析 | 第54-55页 |
| ·小结与讨论 | 第55-57页 |
| ·免疫原与免疫程序 | 第55页 |
| ·杂交瘤细胞株的选择 | 第55-56页 |
| ·细胞融合 | 第56页 |
| ·亚克隆时间的选择 | 第56-57页 |
| 第五章 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
