| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-16页 |
| ·共轭亚油酸 | 第10-12页 |
| ·共轭亚油酸简介 | 第10页 |
| ·共轭亚油酸的检测 | 第10-11页 |
| ·共轭亚油酸的合成 | 第11-12页 |
| ·亚油酸异构酶基因的研究进展 | 第12-14页 |
| ·立题意义 | 第14页 |
| ·主要研究内容 | 第14-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-22页 |
| ·材料与设备 | 第16-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·实验主要试剂 | 第16页 |
| ·实验主要设备 | 第16-17页 |
| ·培养基及引物 | 第17-18页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·PCR 引物 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-22页 |
| ·亚油酸异构酶基因的PCR 扩增 | 第18页 |
| ·亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第18页 |
| ·构建工程菌pET28a/E. coli BL21(DE3)和pET28a-LAI/E. coli BL21(DE3) | 第18页 |
| ·优化重组酶表达的诱导条件 | 第18页 |
| ·镍柱初步纯化重组酶 | 第18页 |
| ·气相色谱法检测重组酶活性 | 第18页 |
| ·亚油酸异构酶基因在酵母菌中的表达 | 第18-21页 |
| ·构建克隆载体pGMT-LAI | 第18-19页 |
| ·构建表达载体pKLAC1-LAI | 第19页 |
| ·构建工程菌pKLAC1-LAI/K.lactis GG799 和pKLAC1/K.lactis GG799 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳检测重组亚油酸异构酶的表达 | 第19-20页 |
| ·气相色谱检测重组亚油酸异构酶的活性 | 第20-21页 |
| ·亚油酸异构酶基因在乳酸菌中的表达 | 第21-22页 |
| ·构建载体pGMT-LAIL | 第21页 |
| ·构建表达载体pMG36e-LAI | 第21页 |
| ·构建工程菌pMG36e-LAI/L.lactis MG1363 和pMG36e/L.lactis MG1363 | 第21-22页 |
| 3 结果与讨论 | 第22-38页 |
| ·亚油酸异构酶基因的PCR 扩增 | 第22-25页 |
| ·植物乳杆菌ZS2058 基因组提取 | 第22页 |
| ·从L. plantarum ZS2058 扩增目的基因 | 第22-23页 |
| ·L. plantarum ZS2058 亚油酸异构酶基因序列 | 第23-25页 |
| ·亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第25-27页 |
| ·优化重组酶表达的诱导条件 | 第25-26页 |
| ·镍柱初步纯化重组酶 | 第26-27页 |
| ·气相色谱检测重组酶活性 | 第27页 |
| ·亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母中的表达 | 第27-36页 |
| ·构建亚克隆载体pGMT-LAI | 第27-29页 |
| ·构建表达载体pKLAC1-LAI | 第29-30页 |
| ·构建工程菌pKLAC1-LAI/K.lactis GG799 和pKLAC1/K.lactis GG799 | 第30-32页 |
| ·质粒pKLAC1-LAI 和pKLAC1 的线性化 | 第30-31页 |
| ·重组菌株的整合鉴定 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE 检测重组亚油酸异构酶的表达 | 第32-34页 |
| ·发酵时间的初步确定 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的分泌表达 | 第33-34页 |
| ·气相色谱检测重组亚油酸异构酶活性 | 第34-36页 |
| ·标准品CLA 和LA 保留时间的确定 | 第34-35页 |
| ·气相色谱检测重组亚油酸异构酶活性 | 第35-36页 |
| ·亚油酸异构酶基因在乳酸乳球菌中的表达 | 第36-38页 |
| ·构建亚克隆载体pGMT-LAIL | 第36-37页 |
| ·构建表达载体pMG36e-LAI | 第37-38页 |
| 主要结论 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46-47页 |
| 附表 | 第47-48页 |
