摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-11页 |
第一章 绪论 | 第11-31页 |
·文献综述 | 第11-27页 |
·RNAi 的发现 | 第11-12页 |
·RNAi 的组分 | 第12-14页 |
·RNA 沉默的机理 | 第14-17页 |
·RNAi 能够保持基因组的完整和它的防御作用 | 第17页 |
·siRNA 生成途径的差异 | 第17-18页 |
·small RNA 对染色体DNA 的影响 | 第18-19页 |
·RNAi 的应用 | 第19-20页 |
·RNAi 文库研究进展 | 第20-27页 |
·研究背景、目的和意义 | 第27-29页 |
·试验设计 | 第29-31页 |
第二章 拟南芥RNAi 文库的构建 | 第31-53页 |
·试验材料 | 第31页 |
·试验方法 | 第31-34页 |
·大肠杆菌电击感受态细胞的制备及转化 | 第31页 |
·酶连体系的转化 | 第31页 |
·碱裂解法提取质粒DNA | 第31-32页 |
·cDNA 文库的酶切消化处理 | 第32页 |
·cDNA 片段克隆到中间载体 | 第32-33页 |
·DNA 片段连接成单链环状DNA | 第33页 |
·单链环状DNA 经Phi29 DNA 聚合酶扩增 | 第33-34页 |
·植物RNAi 表达载体的构建 | 第34页 |
·拟南芥RNAi 文库的形成 | 第34页 |
·拟南芥质粒型cDNA 文库的获得 | 第34页 |
·结果与分析 | 第34-50页 |
·拟南芥cDNA 文库的鉴定分析 | 第34-35页 |
·拟南芥cDNA 文库片段化 | 第35-37页 |
·cDNA 片段克隆到中间载体 | 第37-39页 |
·cDNA 片段连接形成单链环状DNA | 第39-40页 |
·单链环状DNA 的滚环扩增 | 第40-43页 |
·拟南芥RNAi 表达文库的形成 | 第43-50页 |
·讨论 | 第50-53页 |
第三章 拟南芥RNAi 突变体库的初步创制 | 第53-75页 |
·试验材料 | 第53页 |
·试验方法 | 第53-56页 |
·农杆菌电击感受态细胞的制备 | 第53页 |
·拟南芥大规模遗传转化,筛选和鉴定 | 第53-54页 |
·植物基因组DNA 提取 | 第54-55页 |
·植物材料总RNA 的提取 | 第55页 |
·反转录 | 第55页 |
·Northern blotting | 第55页 |
·转基因植株的GUS 染色 | 第55-56页 |
·结果与分析 | 第56-73页 |
·农杆菌的鉴定 | 第56页 |
·转基因拟南芥的潮霉素筛选 | 第56-57页 |
·部分转基因拟南芥表型分析 | 第57-61页 |
·转基因拟南芥的鉴定和靶基因分析 | 第61-65页 |
·RNAi 对基因家族靶基因表达的影响 | 第65-68页 |
·RNAi 对功能不同的靶基因表达的影响 | 第68-73页 |
·讨论 | 第73-75页 |
第四章 全文结论与工作创新点 | 第75-77页 |
·主要结论 | 第75页 |
·工作创新点及研究意义 | 第75-77页 |
参考文献 | 第77-84页 |
致谢 | 第84-85页 |
作者简历 | 第85页 |