| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-23页 |
| ·IGFⅠ基因的研究进展 | 第10-17页 |
| ·胰岛素样生长因子家族概述 | 第10页 |
| ·IGFⅠ基因的生物学特征 | 第10-17页 |
| ·IGFⅠ基因的研究展望 | 第17页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统概述 | 第17-18页 |
| ·表达载体 | 第18页 |
| ·表达系统类型 | 第18页 |
| ·Real-time Quantitative PCR 检测系统概述 | 第18-19页 |
| ·酶联免疫吸附测定概述 | 第19页 |
| ·转基因动物研究进展 | 第19-21页 |
| ·转基因动物的研究方法及其特点 | 第20页 |
| ·转基因动物的应用 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·实验用细胞和菌株 | 第23页 |
| ·克隆与表达载体 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·主要药品、试剂及配制 | 第24-25页 |
| ·主要分子生物学软件和生物信息学网站 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-39页 |
| ·hIGFⅠ基因cDNA 的TA 克隆 | 第25-29页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1-hIGFⅠ的构建 | 第29-31页 |
| ·转染用质粒的制备 | 第31-33页 |
| ·PK-15 细胞转染实验 | 第33-34页 |
| ·hIGFⅠ基因在PK-15 细胞内表达的检测 | 第34-38页 |
| ·实验数据分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-51页 |
| ·hIGFⅠ基因cDNA 的TA 克隆 | 第39-40页 |
| ·总RNA 质量检测 | 第39页 |
| ·hIGFⅠ基因的RT-PCR 扩增 | 第39页 |
| ·hIGFⅠ基因PCR 产物的纯化 | 第39-40页 |
| ·重组克隆质粒 pMD18-T-hIGFⅠ的鉴定 | 第40页 |
| ·hIGFⅠ基因序列的测定 | 第40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40-44页 |
| ·目的片段的获得 | 第40-41页 |
| ·pcDNA3.1 质粒的线性化处理及回收 | 第41页 |
| ·pcDNA3.1-hIGFⅠ重组载体的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第42-43页 |
| ·转染用高纯度质粒制备 | 第43-44页 |
| ·PK-15 细胞培养及pcDNA3.1-hIGFⅠ重组质粒的转染 | 第44-46页 |
| ·PK-15 细胞培养及转染效果 | 第44-45页 |
| ·G418 筛选浓度的确立 | 第45页 |
| ·PK-15 单克隆细胞的筛选 | 第45-46页 |
| ·单克隆细胞的纯化与富集 | 第46页 |
| ·外源基因表达的检测 | 第46-51页 |
| ·荧光定量PCR 检测 | 第46-49页 |
| ·酶联免疫吸附测定 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| ·用于克隆目的基因的引物 | 第51页 |
| ·载体构建 | 第51-53页 |
| ·用于RT-PCR 反应的引物浓度 | 第53页 |
| ·ELISA 检测过程需要注意的问题 | 第53页 |
| ·关于外源基因表达检测的几个问题 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |