| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-25页 |
| ·发现新基因或新的靶基因的现状 | 第13-14页 |
| ·发现药物基因或药物靶基因的方法 | 第14-15页 |
| ·表达克隆法简介 | 第15-16页 |
| ·逆转录病毒表达克隆系统 | 第16-23页 |
| ·逆转录病毒载体系统 | 第17-19页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第19-21页 |
| ·高通量的磁力细胞筛选法(MACS)与精确的流式细胞仪分选法(FACS) | 第21-23页 |
| ·ICOS、CD28简介 | 第23-24页 |
| ·ICOS | 第23-24页 |
| ·CD28 | 第24页 |
| ·本研究的目的、意义与创新点 | 第24-25页 |
| 2 材料 | 第25-27页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·主要药品及试剂 | 第25页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第25-27页 |
| 3 方法 | 第27-42页 |
| ·逆转录病毒cDNA文库的构建 | 第27-33页 |
| ·人T淋巴细胞的分离与活化 | 第27页 |
| ·活化的人T淋巴细胞总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·活化的人T淋巴细胞mRNA的分离 | 第28页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第28-29页 |
| ·第二链cDNA的合成及末端平滑化 | 第29-30页 |
| ·cDNA片段与接头的连接、限制性酶酶切、胶回收去小片段 | 第30-31页 |
| ·pBMN-IRES-EGFP逆转录病毒载体的制备 | 第31-32页 |
| ·胶回收cDNA片段与pBMN-IRES-EGFP逆转录病毒载体连接 | 第32页 |
| ·E.coli DH5α电转化感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·人T淋巴细胞逆转录病毒cDNA文库的电转化 | 第32-33页 |
| ·人T淋巴细胞逆转录病毒cDNA文库质量的鉴定与扩增 | 第33页 |
| ·产生重组逆转录病毒包装细胞系的培养 | 第33-35页 |
| ·293-EcoPack细胞复苏 | 第33-34页 |
| ·293-EcoPack细胞传代 | 第34页 |
| ·293-EcoPack细胞冻存 | 第34-35页 |
| ·宿主细胞BaF3的培养 | 第35页 |
| ·WEHI细胞的培养 | 第35页 |
| ·BaF3的培养 | 第35页 |
| ·逆转录病毒文库转染293-EcoPack细胞 | 第35-37页 |
| ·质粒的准备 | 第35-36页 |
| ·cDNA文库转染293-EcoPack细胞 | 第36-37页 |
| ·逆转录病毒感染BaF3细胞 | 第37页 |
| ·高通量MACS/FACS表达克隆筛选系统筛选并鉴定ICOS | 第37-40页 |
| ·MACS粗筛选ICOS | 第37-38页 |
| ·FACS精筛选ICOS | 第38-39页 |
| ·鉴定表达ICOS的细胞 | 第39-40页 |
| ·高通量MACS/FACS表达克隆筛选系统灵敏度的检测 | 第40页 |
| ·利用高通量MACS/FACS表达克隆筛选系统筛选并鉴定CD28 | 第40-42页 |
| ·MACS/FACS筛选CD28 | 第40-41页 |
| ·鉴定表达CD28的细胞 | 第41-42页 |
| 4 实验结果 | 第42-57页 |
| ·逆转录病毒cDNA文库的构建 | 第42-46页 |
| ·活化的人T淋巴细胞总RNA的提取 | 第42页 |
| ·活化的人T淋巴细胞mRNA的分离 | 第42-43页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第43-44页 |
| ·第二链cDNA的合成 | 第44页 |
| ·pBMN-IRES-EGFP逆转录病毒载体的制备 | 第44-45页 |
| ·逆转录病毒cDNA文库质量鉴定 | 第45-46页 |
| ·逆转录病毒文库转染293-EcoPack细胞 | 第46-48页 |
| ·重组逆转录病毒感染BaF3细胞 | 第48页 |
| ·高通量MACS/FACS表达克隆筛选系统筛选并鉴定ICOS | 第48-51页 |
| ·高通量MACS/FACS表达克隆筛选系统灵敏度的检测 | 第51-54页 |
| ·高通量MACS/FACS表达克隆筛选系统筛选并鉴定CD28 | 第54-57页 |
| ·MACS/FACS筛选CD28 | 第54-55页 |
| ·鉴定表达CD28的细胞 | 第55-57页 |
| 5 讨论 | 第57-62页 |
| ·逆转录病毒cDNA文库的构建 | 第57-60页 |
| ·人白细胞的收集 | 第57页 |
| ·总RNA的提取 | 第57-58页 |
| ·高质量的mRNA的提取 | 第58-59页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第59页 |
| ·制备E.coli DH5α电转化感受态细胞 | 第59页 |
| ·逆转录病毒文库电转化效率 | 第59-60页 |
| ·逆转录病毒载体的选择 | 第60页 |
| ·包装细胞的最佳密度 | 第60页 |
| ·高通量的磁力细胞筛选法(MACS)与精确的流式细胞仪分选法(FACS) | 第60-62页 |
| 6 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 附录A | 第74-75页 |
| 附录B | 第75-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第77页 |
