| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-12页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| ·热休克蛋白70 综述 | 第12-20页 |
| ·热休克蛋白的分类 | 第12-13页 |
| ·HSP70 的进化 | 第13-14页 |
| ·HSP70 分子结构和生物学特性 | 第14-15页 |
| ·hsp70 基因的表达调控 | 第15-17页 |
| ·HSP70 的生物学功能 | 第17-20页 |
| ·淡水涡虫研究现状 | 第20-22页 |
| ·淡水涡虫研究历程 | 第20-21页 |
| ·涡虫再生研究进展 | 第21-22页 |
| ·立题依据与意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-42页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·实验材料来源与处理 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·实验主要器材及设备 | 第24-25页 |
| ·实验主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·所用引物序列 | 第26-27页 |
| ·实验方法与步骤 | 第27-42页 |
| ·总RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·cDNA 的制备 | 第28-29页 |
| ·日本三角涡虫hsp70 基因EST 的获取 | 第29-31页 |
| ·PCR 产物的克隆与检测 | 第31-32页 |
| ·RACE 技术扩增日本三角涡虫hsp70 基因全长 | 第32-33页 |
| ·日本三角涡虫hsp70 基因开放阅读框(ORF)的扩增 | 第33-35页 |
| ·日本三角涡虫hsp70 基因半定量RT-PCR 检测 | 第35页 |
| ·日本三角涡虫HSP70 蛋白多克隆抗体制备 | 第35-41页 |
| ·HSP70 蛋白表达水平分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-60页 |
| ·日本三角涡虫总RNA 的提取与cDNA 的转录 | 第42页 |
| ·日本三角涡虫hsp70 基因EST 的获得 | 第42-43页 |
| ·3’RACE 和5’RACE 扩增的片段 | 第43-44页 |
| ·Djhsp70 基因生物信息学分析 | 第44-51页 |
| ·Djhsp70 基因开放阅读框(ORF)的分析 | 第44-47页 |
| ·日本三角涡虫HSP70 蛋白二级结构分析 | 第47页 |
| ·日本三角涡虫HSP70 蛋白三维结构预测分析 | 第47-48页 |
| ·邻接法构建HSP70 家族亲缘关系树 | 第48-51页 |
| ·半定量RT-PCR 检测Djhsp70 基因的表达变化 | 第51-53页 |
| ·不同温度条件处理 | 第51页 |
| ·饥饿处理 | 第51-52页 |
| ·切割损伤处理 | 第52-53页 |
| ·Djhsp70 基因片段的扩增 | 第53页 |
| ·目的基因片段与克隆载体连接后的双酶切鉴定 | 第53页 |
| ·目的基因与表达载体连接后的双酶切鉴定与测序 | 第53-54页 |
| ·日本三角涡虫HSP70 蛋白的诱导表达和纯化 | 第54-55页 |
| ·日本三角涡虫HSP70 蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·日本三角涡虫HSP70 蛋白的纯化 | 第55页 |
| ·日本三角涡虫HSP70 蛋白多克隆抗体的制备与效价检测 | 第55-56页 |
| ·日本三角涡虫HSP70 蛋白多克隆抗体的制备 | 第55-56页 |
| ·Dlot Blot 法检测抗体效价 | 第56页 |
| ·多克隆抗体的特异性检测 | 第56页 |
| ·不同处理条件下涡虫体内 HSP70 蛋白的表达情况分析 | 第56-60页 |
| ·不同温度处理条件下的分析 | 第56-57页 |
| ·饥饿处理条件下的分析 | 第57页 |
| ·切割处理条件下的分析 | 第57-60页 |
| 4 讨论 | 第60-66页 |
| ·HSP70 的生物学信息分析 | 第60页 |
| ·淡水涡虫的进化亲缘关系 | 第60-62页 |
| ·三种处理条件下涡虫 HSP70 的变化分析 | 第62-66页 |
| ·热刺激处理 | 第62-63页 |
| ·饥饿处理 | 第63页 |
| ·切割损伤处理 | 第63-66页 |
| 5 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第78-79页 |
