| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-21页 |
| 1.1 黑曲霉概述 | 第8-10页 |
| 1.1.1 黑曲霉生理特征及其应用 | 第8-9页 |
| 1.1.2 黑曲霉基因组学 | 第9-10页 |
| 1.2 柠檬酸概述 | 第10-12页 |
| 1.2.1 柠檬酸的功能与市场分析 | 第10-11页 |
| 1.2.2 发酵法生产柠檬酸的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3 α-葡萄糖苷酶的研究概况 | 第12-14页 |
| 1.3.1 α-葡萄糖苷酶的作用机理 | 第12-13页 |
| 1.3.2 α-葡萄糖苷酶基因相关功能研究 | 第13-14页 |
| 1.4 丝状真菌基因敲除技术 | 第14-17页 |
| 1.4.1 丝状真菌基因敲除研究历史 | 第14-15页 |
| 1.4.2 丝状真菌基因敲除技术 | 第15-17页 |
| 1.5 丝状真菌的遗传转化方法 | 第17-19页 |
| 1.5.1 丝状真菌遗传转化方法概述 | 第17-18页 |
| 1.5.2 农杆菌介导转化系统 | 第18-19页 |
| 1.6 本课题研究的目的、意义 | 第19-20页 |
| 1.7 本论文的主要研究内容 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.4 主要溶液与缓冲液 | 第23-26页 |
| 2.1.5 培养基与抗生素 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-40页 |
| 2.2.1 产柠檬酸黑曲霉的培养及孢子悬液的制备 | 第27页 |
| 2.2.2 产柠檬酸黑曲霉菌丝体的培养 | 第27页 |
| 2.2.3 敲除载体pPZP-214233的构建 | 第27-32页 |
| 2.2.4 农杆菌介导敲除载体pPZP-214233转化产柠檬酸黑曲霉 | 第32-35页 |
| 2.2.5 敲除载体pPZP-40261的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.6 农杆菌介导敲除载体pPZP-40261转化产柠檬酸黑曲霉 | 第36页 |
| 2.2.7 敲除突变菌株生长情况分析 | 第36-37页 |
| 2.2.8 敲除突变菌株及出发菌株发酵参数测定 | 第37-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-58页 |
| 3.1 敲除载体pPZP-214233的构建 | 第40-42页 |
| 3.1.1 α-葡萄糖苷酶A基因左、右同源臂的扩增 | 第40页 |
| 3.1.2 载体框架pPZP和筛选标记HYG片段的获得 | 第40-41页 |
| 3.1.3 敲除载体pPZP-214233的构建 | 第41-42页 |
| 3.2 产柠檬酸黑曲霉中α-葡萄糖苷酶A基因的敲除 | 第42-45页 |
| 3.2.1 潮霉素B对黑曲霉最低抑制浓度的确定 | 第42-43页 |
| 3.2.2 敲除载体pPZP-214233电转至根瘤农杆菌中 | 第43页 |
| 3.2.3 黑曲霉敲除突变株的筛选 | 第43-45页 |
| 3.3 敲除载体pPZP-40261的构建 | 第45-47页 |
| 3.3.1 假定-α-葡萄糖苷酶基因左、右同源臂的扩增 | 第45页 |
| 3.3.2 载体框架pPZP和筛选标记的获得 | 第45-46页 |
| 3.3.3 敲除载体pPZP-40261的构建 | 第46-47页 |
| 3.4 产柠檬酸黑曲霉中假定-α-葡萄糖苷酶基因40261的敲除 | 第47-49页 |
| 3.4.1 pPZP-40261电转至根瘤农杆菌中 | 第47-48页 |
| 3.4.2 黑曲霉敲除突变株的筛选 | 第48-49页 |
| 3.5 敲除突变菌株生长情况分析 | 第49-52页 |
| 3.5.1 敲除突变株与出发菌株菌落表型特征比较 | 第49-50页 |
| 3.5.2 敲除突变株与出发菌株生长速率比较 | 第50-51页 |
| 3.5.3 敲除突变株与出发菌株菌丝球形态比较 | 第51-52页 |
| 3.5.4 敲除突变株与出发菌株菌丝球周长比较 | 第52页 |
| 3.6 敲除突变菌株及出发菌株发酵参数测定 | 第52-58页 |
| 3.6.1 敲除突变株及出发菌株总糖含量的测定 | 第52-54页 |
| 3.6.2 敲除突变株及出发菌株还原糖含量的测定 | 第54-55页 |
| 3.6.3 敲除突变株及出发菌株异麦芽糖含量的测定 | 第55-56页 |
| 3.6.4 敲除突变株及出发菌株柠檬酸含量的测定 | 第56-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 4.1 全文总结 | 第58页 |
| 4.2 论文的创新点 | 第58页 |
| 4.3 论文的不足之处 | 第58-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-67页 |
| 7 论文发表情况 | 第67-68页 |
| 8 致谢 | 第68页 |
