| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1. 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 杧果概述 | 第11页 |
| 1.2 杧果的价值 | 第11-12页 |
| 1.2.1 杧果的经济价值 | 第11页 |
| 1.2.2 杧果的营养价值 | 第11-12页 |
| 1.2.3 杧果的环境价值 | 第12页 |
| 1.2.4 杧果的药用价值 | 第12页 |
| 1.3 三种杧果实验材料的特点介绍 | 第12-13页 |
| 1.4 Micro-Tom番茄 | 第13-15页 |
| 1.4.1 Micro-Tom番茄的品种由来和具体优势 | 第14页 |
| 1.4.2 Micro-Tom番茄在功能基因组学、高通量诱变和启动子功能研究中的应用 | 第14-15页 |
| 1.5 病毒诱导的基因沉默(VIGS)与基因的过量表达 | 第15页 |
| 1.6 果实色泽的研究现状 | 第15-17页 |
| 1.7 叶绿素的结构与作用 | 第17-18页 |
| 1.8 叶绿素的降解 | 第18-23页 |
| 1.8.1 叶绿素的酶降解 | 第18-19页 |
| 1.8.2 光对叶绿素降解的影响 | 第19-20页 |
| 1.8.3 温度对叶绿素降解的影响 | 第20-21页 |
| 1.8.4 金属离子对叶绿素降解的影响 | 第21页 |
| 1.8.5 pH对叶绿素降解的影响 | 第21页 |
| 1.8.6 盐胁迫和活性氧含量对叶绿素降解的影响 | 第21-22页 |
| 1.8.7 其他外因对叶绿素降解的影响 | 第22-23页 |
| 1.9 PAO和RCCR与叶绿素降解的关系 | 第23-24页 |
| 1.9.1 PAO与叶绿素降解的关系 | 第23页 |
| 1.9.2 RCCR与叶绿素降解的关系 | 第23-24页 |
| 1.10 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 1.11 研究的技术路线 | 第25-26页 |
| 2. 材料与方法 | 第26-44页 |
| 2.1 材料 | 第26页 |
| 2.1.1 实验材料及处理 | 第26页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第26页 |
| 2.1.3 药品与试剂 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-44页 |
| 2.2.1 三个杧果品种果皮RNA的提取、检测和纯化 | 第26-28页 |
| 2.2.2 RACE实验方法 | 第28-33页 |
| 2.2.3 杧果MiPAO和MiRCCR基因全长的克隆 | 第33-34页 |
| 2.2.4 杧果MiPAO和MiRCCR基因相关生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 2.2.5 三个柁果品种果皮着色相关生理指标的测定 | 第35-37页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第37-38页 |
| 2.2.7 杧果MiPAO和MiRCCR基因表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.8 Micro-Tom番茄遗传转化 | 第39-41页 |
| 2.2.9 Micro-Tom番茄果实叶绿素和类胡萝卜素的含量测定 | 第41-42页 |
| 2.2.10 Micro-Tom番茄果实半定量PCR检测 | 第42-44页 |
| 3. 结果与分析 | 第44-81页 |
| 3.1 克隆得到三个杧果品种MiPAO和MiRCCR基因 | 第44-47页 |
| 3.1.1 提取了三个杧果品种果皮总RNA | 第44页 |
| 3.1.2 获取MiPAO和MiRCCR基因的3'、5'片段 | 第44-46页 |
| 3.1.3 获取三个杧果品种的MiPAO和MiRCCR基因的全长序列 | 第46-47页 |
| 3.2 杧果MiPAO和MiRCCR基因的相关生物信息学分析 | 第47-56页 |
| 3.3 三个杧果品种果皮着色相关生理指标的组分和含量测定 | 第56-62页 |
| 3.3.1 叶绿素的含量 | 第56-57页 |
| 3.3.2 花色素苷含量的主要组分与含量 | 第57-60页 |
| 3.3.3 β-胡萝卜素的含量 | 第60-62页 |
| 3.4 MiPAO和iRCCR基因在三个杧果品种果皮软熟期时的表达特性测定 | 第62-65页 |
| 3.4.1 杧果MiPAO和MiRCCR基因引物溶解曲线及标准曲线的制作 | 第62-64页 |
| 3.4.2 杧果MiPAO和MiRCCR基因在三个杧果品种软熟期果皮中的相对表达量 | 第64-65页 |
| 3.5 杧果MiPAO和MiRCCR基因表达载体构建 | 第65-71页 |
| 3.5.1 MiPAO和MiRCCR基因沉默载体构建 | 第65-68页 |
| 3.5.2 MiPAO和MiRCCR基因过量表达载体构建 | 第68-71页 |
| 3.6 Micro-Tom番茄表型的观察与分析 | 第71-77页 |
| 3.6.1 病毒诱导的基因沉默Micro-Tom番茄表型 | 第71-76页 |
| 3.6.2 过量表达Micro-Tom番茄表型 | 第76-77页 |
| 3.7 测定Micro-Tom番茄果实叶绿素和类胡萝卜素的含量 | 第77-79页 |
| 3.7.1 病毒诱导的基因沉默Micro-Tom番茄果实成熟期叶绿素的含量 | 第77页 |
| 3.7.2 过量表达Micro-Tom番茄果实成熟期叶绿素的含量 | 第77-78页 |
| 3.7.3 病毒诱导的基因沉默Micro-Tom番茄果实成熟期类胡萝卜素的含量 | 第78-79页 |
| 3.7.4 过量表达Micro-Tom番茄果实成熟期类胡萝卜素的含量 | 第79页 |
| 3.8 Micro-Tom番茄果实半定量PCR检测 | 第79-81页 |
| 3.8.1 半定量PCR检测SlPAO和SlRCCR基因的沉默 | 第79-80页 |
| 3.8.2 半定量PCR检测MiPAO和MiRCCR基因的过量表达 | 第80-81页 |
| 4. 讨论 | 第81-86页 |
| 4.1 三个杧果品种MiPAO和MiRCCR基因的全长克隆及生物信息学的讨论 | 第81页 |
| 4.2 三个杧果品种果皮着色相关生理指标组分与含量的讨论 | 第81-82页 |
| 4.3 MiPAO和MiRCCR基因的表达特性的讨论 | 第82-83页 |
| 4.4 病毒诱导的基因沉默和植物过量表达及转基因研究的讨论 | 第83-86页 |
| 5. 结论 | 第86-87页 |
| 6. 下一步工作计划 | 第87-88页 |
| 7. 参考文献 | 第88-100页 |
| 8. 中英文缩略语 | 第100-102页 |
| 9. 附录 | 第102-109页 |
| 附录一: 本实验所使用的主要仪器设备 | 第102-103页 |
| 附录二: 主要实验试剂及药品配方 | 第103-104页 |
| 附录三: pTRV_2与pGreenⅡ 62-SK质粒图谱 | 第104-105页 |
| 附录四: MiSGR_1和MiSGR_2溶解曲线、扩增曲线、标准曲线、相对表达量 | 第105-108页 |
| 附录五: 作者简历及发表论文情况 | 第108-109页 |
| 10. 致谢 | 第109页 |
