| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 真核生物内含子进化研究 | 第16-74页 |
| 1 绪论 | 第16-39页 |
| 1.1 内含子概述 | 第16-19页 |
| 1.1.1 内含子类型及特点 | 第16-17页 |
| 1.1.2 内含子的剪接 | 第17-19页 |
| 1.2 内含子的功能研究 | 第19-23页 |
| 1.2.1 内含子与基因表达 | 第19-22页 |
| 1.2.2 启动子功能 | 第22页 |
| 1.2.3 内含子可变剪接的重要作用 | 第22-23页 |
| 1.3 内含子研究的应用 | 第23页 |
| 1.3.1 内含子可作为系统发生的标记 | 第23页 |
| 1.3.2 内含子可用于进化距离的测定 | 第23页 |
| 1.3.3 内含子可用于基因表达调控 | 第23页 |
| 1.4 内含子的起源与进化 | 第23-32页 |
| 1.4.1 内含子的起源 | 第24页 |
| 1.4.2 内含子的进化 | 第24-29页 |
| 1.4.3 内含子丢失和获得的机制 | 第29-32页 |
| 1.5 内含子进化的研究方法及主要进展 | 第32-37页 |
| 1.5.1 内含子进化的研究方法 | 第32页 |
| 1.5.2 内含子进化研究的常用软件 | 第32-34页 |
| 1.5.3 内含子进化研究主要进展 | 第34-37页 |
| 1.6 果蝇内含子研究的分子标记热激蛋白 | 第37-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-52页 |
| 2.1 内含子丢失/获得比较分析的材料和方法 | 第39-43页 |
| 2.1.1 蛋白质保守序列中内含子位点的保守性分析 | 第39-40页 |
| 2.1.2 比较蛋白质序列和系统进化分析 | 第40-42页 |
| 2.1.3 内含子获得和丢失的分析 | 第42-43页 |
| 2.1.4 每个基因在不同的物种中的内含子平均数以及内含子插入相的计算 | 第43页 |
| 2.2 果蝇内含子进化研究材料和方法 | 第43-52页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 2.2.3 数据处理 | 第50-51页 |
| 2.2.4 系统发育分析 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-68页 |
| 3.1 同源基因保守编码区序列中内含子丢失和获得比较分析结果 | 第52-59页 |
| 3.1.1 真核生物中的内含子丢失和获得 | 第52-56页 |
| 3.1.2 内含子在各真核生物基因中的插入相分布和平均个数 | 第56-59页 |
| 3.2 果蝇内含子进化研究结果 | 第59-68页 |
| 3.2.1 PCR和RT-PCR结果 | 第59-60页 |
| 3.2.2 统计检验 | 第60-61页 |
| 3.2.3 Hsp27基因的核苷酸序列分析 | 第61-66页 |
| 3.2.4 Hsp27序列系统进化分析 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-74页 |
| 4.1 脊椎动物共同祖先分化时的内含子获得 | 第68页 |
| 4.2 双翅目昆虫中的内含子丢失 | 第68-69页 |
| 4.3 果蝇Hsp27基因的进化分析 | 第69-70页 |
| 4.4 果蝇Hsp27内含子获得与系统进化关系是一致的 | 第70页 |
| 4.5 内含子获得的模型和机制 | 第70-72页 |
| 4.6 本研究内含子分析方法与高通量生物信息学方法的比较 | 第72-74页 |
| 第二章 特发性基底节钙化果蝇研究模型构建 | 第74-123页 |
| 1 绪论 | 第74-91页 |
| 1.1 基底节钙化综述 | 第74-80页 |
| 1.1.1 基底节结构与功能 | 第74-76页 |
| 1.1.2 基底节钙化概述 | 第76-77页 |
| 1.1.3 特发性基底节钙化研究进展 | 第77-80页 |
| 1.2 果蝇模型 | 第80-91页 |
| 1.2.1 果蝇的生活史 | 第80-81页 |
| 1.2.2 果蝇丰富的性状表现 | 第81-82页 |
| 1.2.3 果蝇的平衡染色体 | 第82-83页 |
| 1.2.4 GAL4/UAS系统 | 第83-84页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9技术 | 第84-86页 |
| 1.2.6 果蝇的神经肌肉突触 | 第86-91页 |
| 2 材料与方法 | 第91-108页 |
| 2.1 实验材料 | 第91-92页 |
| 2.1.1 果蝇品系 | 第91页 |
| 2.1.2 实验抗体 | 第91-92页 |
| 2.2 果蝇的遗传学操作 | 第92-94页 |
| 2.2.1 果蝇的饲养 | 第92页 |
| 2.2.2 果蝇性别的鉴别 | 第92-94页 |
| 2.2.3 处女蝇的挑选方法 | 第94页 |
| 2.3 UAS-CG42575高表达转基因果蝇的构建 | 第94-100页 |
| 2.3.1 重组质粒UAS-CG42575的构建 | 第94-97页 |
| 2.3.2 显微注射 | 第97-99页 |
| 2.3.3 转基因果蝇的定位 | 第99-100页 |
| 2.4 点突变果蝇工具的构建 | 第100-102页 |
| 2.4.1 构建点突变重组质粒 | 第101-102页 |
| 2.4.2 显微注射以及筛选定位 | 第102页 |
| 2.5 UAS-CG42575-GFP转基因果蝇的构建 | 第102-104页 |
| 2.5.1 UAS-CG42575-GFP重组质粒的构建 | 第103-104页 |
| 2.5.2 显微注射以及筛选定位 | 第104页 |
| 2.6 缺失突变果蝇工具株的构建 | 第104-106页 |
| 2.6.1 gRNA的设计及表达载体的构建 | 第104-105页 |
| 2.6.2 显微注射及缺失突变体的鉴定 | 第105-106页 |
| 2.7 果蝇三龄幼虫的解剖与免疫染色 | 第106-107页 |
| 2.7.1 三龄幼虫的解剖 | 第106页 |
| 2.7.2 免疫染色 | 第106-107页 |
| 2.7.3 图片采集 | 第107页 |
| 2.8 Anti-CG42575多克隆抗体的制备 | 第107-108页 |
| 3 实验结果 | 第108-119页 |
| 3.1 果蝇与人类SLC20A2的同源基因是CG42575 | 第108-109页 |
| 3.2 CG42575高表达转基因果蝇的获得 | 第109-112页 |
| 3.3 CG42575的无功能突变胚胎期致死说明该基因是发育所必须的 | 第112-113页 |
| 3.4 CG42575的S588W位点突变影响神经肌肉突触发育 | 第113-115页 |
| 3.5 以GFP标记的CG42575高表达转基因果蝇的获得 | 第115页 |
| 3.6 果蝇体内CG42575的亚细胞定位 | 第115-119页 |
| 3.6.1 CG42575定位在果蝇大脑神经细胞胞体的细胞膜上 | 第116-118页 |
| 3.6.2 CG42575定位在神经肌肉接头处的细胞膜上 | 第118-119页 |
| 4 讨论及结论 | 第119-123页 |
| 4.1 讨论 | 第119-121页 |
| 4.1.1 果蝇疾病模型 | 第119-120页 |
| 4.1.2 SLC20A2与磷酸盐体内稳态关系 | 第120页 |
| 4.1.3 SLC20A2突变导致IBGC的分子机制 | 第120-121页 |
| 4.2 结论 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-143页 |
| 发表文章 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
