| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 Ⅲ型分泌系统及相关蛋白 | 第10-14页 |
| 1.1.1 Ⅲ型分泌系统 | 第10-12页 |
| 1.1.2 Ⅲ型分泌系统/革兰氏阴性菌相关生物分子 | 第12-14页 |
| 1.1.2.1 效应蛋白HopU1及其底物蛋白AtGrp7 | 第12-13页 |
| 1.1.2.2 凝集素LecB与生物多糖/寡糖 | 第13页 |
| 1.1.2.3 效应蛋白AvrRpt2的伴侣蛋白ROC1 | 第13-14页 |
| 1.2 生物核磁共振 | 第14-17页 |
| 1.2.1 核磁共振的概念 | 第14-15页 |
| 1.2.2 蛋白质核磁共振的基本原理 | 第15-16页 |
| 1.2.3 核磁共振在生物分子研究中的优点 | 第16-17页 |
| 1.2.4 核磁共振在生物寡糖结构解析中的应用 | 第17页 |
| 1.3 本论文的主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 AtGrp7RRM结构域的纯化及其结构与结合的分析 | 第18-33页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 AtGrp7RRM结构域(AtGrp7_(1-90))克隆和过表达 | 第18-19页 |
| 2.2.2 AtGrp7_(1-90)重折叠和纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.3 等温滴定量热实验 | 第20页 |
| 2.2.4 核磁共振实验 | 第20-21页 |
| 2.2.5 CS-Rosetta结构模型 | 第21页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第21-32页 |
| 2.3.1 质粒设计和AtGrp7_(1-90)的表达优化与初步纯化 | 第21-23页 |
| 2.3.2 变性-复性法纯化AtGrp7_(1-90) | 第23-26页 |
| 2.3.3 AtGrp7_(1-90)重折叠与结合的验证 | 第26-28页 |
| 2.3.4 AtGrp7_(1-90)的结构模型与结合分析 | 第28-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 蛋白质的核磁共振信号归属及相互作用初探 | 第33-50页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第33-39页 |
| 3.2.1 样品制备 | 第33-35页 |
| 3.2.1.1 ROC1与HopU1克隆和过表达 | 第33-34页 |
| 3.2.1.2 ROC1与HopU1纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.2 三维核磁共振实验相关参数 | 第35页 |
| 3.2.3 核磁谱图数据处理 | 第35页 |
| 3.2.4 AtGrp7RRM结构域与HopU1的核磁滴定 | 第35页 |
| 3.2.5 蛋白质骨架核磁共振信号归属基本原理 | 第35-39页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第39-49页 |
| 3.3.1 AtGrp7RRM和ROC1骨架核磁信号归属 | 第39-48页 |
| 3.3.1.1 谱峰标记 | 第39-41页 |
| 3.3.1.2 谱峰群集处理(clustering) | 第41页 |
| 3.3.1.3 AtGrp7RRM骨架信号归属 | 第41-46页 |
| 3.3.1.4 AtGrp7RRM支链信号归属 | 第46-48页 |
| 3.3.2 AtGrp7RRM与HopU1相互作用初探 | 第48-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 生物寡糖核磁共振分析新方法及其与凝集素的相互作用 | 第50-62页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 样品制备 | 第50-51页 |
| 4.2.1.1 LecB克隆和过表达 | 第50-51页 |
| 4.2.1.2 LecB重折叠和纯化 | 第51页 |
| 4.2.2 三维核磁共振实验相关参数 | 第51-52页 |
| 4.2.3 LecB与岩藻糖和母乳寡糖LNDFHI的核磁滴定实验 | 第52页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第52-61页 |
| 4.3.1 寡糖~1H-~1H同核相关谱中的谱峰重叠 | 第52-54页 |
| 4.3.2 脉冲序列改进前后的谱图对比 | 第54-57页 |
| 4.3.3 改进脉冲序列的优点和母乳寡糖LNDFHI核磁数据解析 | 第57-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-63页 |
| 5.1 结论 | 第62页 |
| 5.2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录A 蛋白表达与纯化 | 第70-74页 |
| 攻读硕士期间公开发表的论文 | 第74页 |
