| 中文摘要 | 第11-18页 |
| 英文摘要 | 第18-26页 |
| 前言 | 第27-30页 |
| 动物、材料与主要仪器 | 第30-33页 |
| 第一部分 小肠缺血再灌注损伤后再生和IEC-6细胞缺氧复氧损伤后增殖诱导Nurr1的表达 | 第33-57页 |
| 材料和方法 | 第34-43页 |
| 1. 动物分组及模型构建 | 第34-35页 |
| 2. IEC-6细胞培养及缺氧复氧模型构建 | 第35-36页 |
| 3. 检测指标 | 第36-43页 |
| 3.1 小肠组织的病理学检测 | 第36-37页 |
| 3.2 小肠组织中Ki-67免疫组织化学染色 | 第37-38页 |
| 3.3 小肠组织中pH3免疫组织荧光染色 | 第38-39页 |
| 3.4 小肠组织或IEC-6细胞中Nurr1蛋白的western blot检测 | 第39-40页 |
| 3.5 小肠组织或IEC-6细胞内中Nurr1的mRNA水平检测 | 第40-42页 |
| 3.6 Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)法检测IEC-6细胞增殖 | 第42页 |
| 3.7 IEC-6细胞Ki-67免疫细胞荧光 | 第42-43页 |
| 4. 统计学处理 | 第43页 |
| 结果 | 第43-53页 |
| 1. 小肠组织形态学观察和病理学分析 | 第43-45页 |
| 2. 小肠组织Ki-67免疫组织化学染色 | 第45-46页 |
| 3. 小肠组织pH3免疫组织荧光染色 | 第46-47页 |
| 4. 小肠组织Nurr1蛋白表达水平的检测 | 第47页 |
| 5. 小肠组织Nurr1 mRNA表达水平的检测 | 第47-48页 |
| 6. IEC-6细胞H/R损伤后Nurr1蛋白表达水平检测 | 第48-49页 |
| 7. IEC-6细胞H/R损伤后Nurr1 mRNA表达水平检测 | 第49-50页 |
| 8. IEC-6细胞H/R损伤后细胞增殖水平的检测 | 第50-51页 |
| 9. IEC-6细胞H/R损伤后细胞Ki-67水平的检测 | 第51-52页 |
| 10. 小肠组织内Nurr1蛋白表达与Ki-67阳性细胞的相关性 | 第52-53页 |
| 11. 小肠组织内Nurr1蛋白表达与pH3阳性细胞的相关性 | 第53页 |
| 讨论 | 第53-56页 |
| 总结 | 第56-57页 |
| 第二部分 Nurr1通过非p53依赖方式抑制p21表达促进IEC-6细胞缺氧复氧损伤后的增殖 | 第57-81页 |
| 材料和方法 | 第58-61页 |
| 1. 细胞培养及缺氧复氧模型构建 | 第58页 |
| 2. 检测指标 | 第58-60页 |
| 2.1 CCK-8法检测IEC-6细胞增殖 | 第58页 |
| 2.2 Si-Nurr1转染 | 第58-59页 |
| 2.3 Nurr1过表达质粒转染 | 第59页 |
| 2.4 Western Blot法检测Nurr1、p53和p21的蛋白表达水平 | 第59-60页 |
| 2.5 RT-PCR检测细胞内Nurr1、p53和p21 mRNA表达水平 | 第60页 |
| 2.6 流式细胞仪测定IEC-6细胞周期 | 第60页 |
| 2.7 免疫荧光检测IEC-6细胞中Ki-67的表达 | 第60页 |
| 3. 统计学处理 | 第60-61页 |
| 结果 | 第61-77页 |
| 1. Si-Nurr1转染IEC-6细胞后Nurr1 mRNA水平的表达 | 第61页 |
| 2. Si-Nurr1转染IEC-6细胞后Nurr1蛋白水平的表达 | 第61-62页 |
| 3. Si-Nurr1转染IEC-6细胞缺氧6h复氧12、24h细胞增殖情况 | 第62-63页 |
| 4. Si-Nurr1转染IEC-6细胞对Ki-67的表达的影响 | 第63-64页 |
| 5. Si-Nurr1转染IEC-6细胞对细胞周期的影响 | 第64-65页 |
| 6. Si-Nurr1转染IEC-6细胞对p21mRNA表达水平的影响 | 第65-66页 |
| 7. Si-Nurr1转染IEC-6细胞对p21蛋白表达水平的影响 | 第66-67页 |
| 8. Si-Nurr1、Si-p21转染IEC-6细胞对细胞增殖的影响 | 第67-68页 |
| 9. Si-Nurr1、si-p21转染IEC-6细胞对细胞周期的影响 | 第68-69页 |
| 10. Si-Nurr1转染IEC-6细胞对p53蛋白表达水平的影响 | 第69-70页 |
| 11. Si-Nurr1、si-p53转染IEC-6细胞对p21表达水平的影响 | 第70-71页 |
| 12. Si-Nurr1、si-p53转染IEC-6细胞对细胞增殖的影响 | 第71页 |
| 13. Si-Nurr1、si-p53转染IEC-6细胞对细胞增殖的影响 | 第71-72页 |
| 14. Nurr1过表达质粒转染IEC-6细胞后对Nurr1、p53和p21mRNA水平表达的影响 | 第72-74页 |
| 15. Nurr1过表达质粒转染IEC-6细胞后对Nurr1、p53和p21蛋白水平表达的影响 | 第74-75页 |
| 16. Nurr1过表达质粒转染IEC-6细胞缺氧6h复氧12、24h细胞增殖情况 | 第75页 |
| 17. Nurr1过表达质粒转染IEC-6细胞Ki-67的表达 | 第75-76页 |
| 18. Nurr1过表达质粒转染IEC-6细胞对细胞周期的影响 | 第76-77页 |
| 讨论 | 第77-80页 |
| 总结 | 第80-81页 |
| 第三部分 Nurr1通过直接结合p21启动子抑制p21基因的转录 | 第81-93页 |
| 材料和方法 | 第82-87页 |
| 1. 细胞培养及缺氧复氧模型构建 | 第82页 |
| 2. 生物信息学 | 第82页 |
| 2.1 p21基因启动子区序列 | 第82页 |
| 2.2 p21基因启动子区中Nurr1结合序列的检测 | 第82页 |
| 3. 检测指标 | 第82-87页 |
| 3.1 染色质免疫沉淀 | 第82-86页 |
| 3.2 荧光素酶报告基因实验 | 第86-87页 |
| 4. 统计学处理 | 第87页 |
| 结果 | 第87-90页 |
| 1. p21基因转录起始点上游2000bp的序列 | 第87-88页 |
| 2. p21基因启动子序列中Nurr1结合序列NBRE-like motifs (NLs)的预测 | 第88-89页 |
| 3. CHIP实验 | 第89页 |
| 4. 荧光素酶( Luciferase)报告基因检测 | 第89-90页 |
| 讨论 | 第90-92页 |
| 总结 | 第92-93页 |
| 第四部分 Nurr1、p53和p21在人小肠缺血标本中的表达 | 第93-101页 |
| 材料和方法 | 第94-95页 |
| 1. 临床小肠缺血病人的标本 | 第94页 |
| 1.1 小肠标本的收集 | 第94页 |
| 1.2 小肠标本的处理 | 第94页 |
| 2. 检测指标 | 第94-95页 |
| 2.1 小肠组织的组织学检测 | 第94页 |
| 2.2 小肠组织中Ki-67免疫组织荧光染色 | 第94页 |
| 2.3 小肠组织中Nurr1、p53和p21的western blot检测 | 第94-95页 |
| 2.4 小肠组织中Nurr1、p53和p21的的mRNA水平检测 | 第95页 |
| 3. 统计学处理 | 第95页 |
| 结果 | 第95-98页 |
| 1. 小肠组织的病理学检测 | 第95-96页 |
| 2. 小肠组织中Ki-67的表达 | 第96页 |
| 3. 小肠组织中Nurr1、p53和p21蛋白的表达 | 第96-97页 |
| 4. 小肠组织中Nurr1、p53和p21 mRNA的表达 | 第97-98页 |
| 讨论 | 第98-100页 |
| 总结 | 第100-101页 |
| 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-108页 |
| 综述 | 第108-129页 |
| 参考文献 | 第118-129页 |
| 缩略词表 | 第129-130页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
