| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| ·L-色氨酸的理学性质和应用 | 第13页 |
| ·L-色氨酸的生产方法 | 第13-15页 |
| ·L-色氨酸的微生物合成机制 | 第15-17页 |
| ·微生物合成L-色氨酸的代谢途径 | 第15-16页 |
| ·微生物合成L-色氨酸的调控机制 | 第16-17页 |
| ·增强L-色氨酸合成的代谢调控策略 | 第17-21页 |
| ·抗反馈抑制作用酶的筛选 | 第17-18页 |
| ·共同途径及色氨酸分支途径的改造 | 第18页 |
| ·中心代谢途径的改造 | 第18-20页 |
| ·转运途径的改造 | 第20-21页 |
| ·L-Trp 前体物合成的代谢调控策略 | 第21页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第21-24页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第21-22页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 AroF 和TrpED 抗反馈抑制突变体的构建及阻遏蛋白基因trpR 的敲除 | 第24-50页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·材料与方法 | 第24-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·试剂和仪器 | 第24-26页 |
| ·培养基和培养条件 | 第26页 |
| ·分子生物学操作 | 第26-31页 |
| ·表达载体pSV 的构建 | 第31页 |
| ·AroF 抗反馈调节突变体的构建 | 第31页 |
| ·TrpED 抗反馈调节突变体的构建 | 第31-32页 |
| ·trpR 基因的敲除 | 第32-33页 |
| ·酶活性检测 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第34页 |
| ·质粒稳定性验证 | 第34页 |
| ·发酵参数的测定 | 第34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-48页 |
| ·原核表达载体pSV 的构建 | 第34-37页 |
| ·aroF 抗反馈调节突变基因的构建及表达 | 第37-42页 |
| ·trpED 抗反馈调节突变基因的构建及表达 | 第42-44页 |
| ·重组质粒对大肠杆菌发酵生产色氨酸的影响 | 第44-45页 |
| ·trpR 基因敲除菌FB-01 的构建 | 第45-47页 |
| ·工程菌FB-01/pSV04 的补料分批发酵 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-50页 |
| 第三章 大肠杆菌色氨酸分解途径和竞争途径的改造 | 第50-60页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·材料与方法 | 第50-53页 |
| ·菌株与质粒 | 第50页 |
| ·试剂与仪器 | 第50-51页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第51页 |
| ·分子生物学操作 | 第51-52页 |
| ·发酵参数的测定 | 第52-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-59页 |
| ·tnaA 基因敲除菌FB-02 的构建 | 第53-54页 |
| ·工程菌FB-02/pSV04 的补料分批发酵 | 第54-55页 |
| ·pheA 基因敲除菌FB-03 的构建 | 第55-56页 |
| ·工程菌FB-03/pSV04 的补料分批发酵 | 第56-57页 |
| ·tyrA 基因敲除菌FB-04 的构建 | 第57-58页 |
| ·工程菌FB-04/pSV04 的补料分批发酵 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 大肠杆菌色氨酸转运系统的改造 | 第60-71页 |
| ·前言 | 第60-61页 |
| ·材料与方法 | 第61-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第61页 |
| ·试剂与仪器 | 第61页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第61页 |
| ·分子生物学操作 | 第61-62页 |
| ·发酵参数的测定 | 第62-63页 |
| ·色氨酸吸收活性的测定 | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-69页 |
| ·mtr 基因敲除菌FB-T1 的构建 | 第63-64页 |
| ·tnaB 基因敲除菌FB-T2 的构建 | 第64-65页 |
| ·aroP 基因敲除菌FB-T3 的构建 | 第65-66页 |
| ·色氨酸吸收系统基因敲除对大肠杆菌色氨酸吸收活性的影响 | 第66页 |
| ·色氨酸吸收系统基因敲除对菌体生长的影响 | 第66-67页 |
| ·色氨酸吸收系统基因敲除对菌体发酵生产色氨酸的影响 | 第67-69页 |
| ·本章小结 | 第69-71页 |
| 第五章 大肠杆菌色氨酸操纵子的改造及表达 | 第71-83页 |
| ·前言 | 第71页 |
| ·材料与方法 | 第71-74页 |
| ·菌株与质粒 | 第71页 |
| ·试剂与仪器 | 第71页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第71-72页 |
| ·分子生物学操作 | 第72-73页 |
| ·重组质粒pSV-aroF~(fbr)-trpE~(fbr)DCBA 的构建 | 第73-74页 |
| ·发酵参数的测定 | 第74页 |
| ·菌株传代稳定性验证 | 第74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-82页 |
| ·色氨酸操纵子的结构分析 | 第74-75页 |
| ·前导肽trpL 10-118 位序列敲除菌 FB-L1 的构建 | 第75-76页 |
| ·菌株 FB-L1 的前导肽trpL1 的二级结构分析 | 第76-77页 |
| ·工程菌FB-L1/pSV04 的补料分批发酵 | 第77-78页 |
| ·色氨酸操纵子trpEDCBA 的酶切位点分析 | 第78页 |
| ·色氨酸操纵子trpE~(fbr)DCBA 的克隆 | 第78-79页 |
| ·色氨酸操纵子trpE~(fbr)DCBA 在pSV04 中的表达 | 第79-81页 |
| ·工程菌FB-T1/pSV05 的补料分批发酵 | 第81-82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 第六章 色氨酸合成代谢中间产物浓度的测定及代谢流分析 | 第83-99页 |
| ·前言 | 第83页 |
| ·材料与方法 | 第83-85页 |
| ·菌株与质粒 | 第83页 |
| ·试剂与仪器 | 第83-84页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第84页 |
| ·样品预处理 | 第84-85页 |
| ·胞内代谢物的检测 | 第85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-93页 |
| ·大肠杆菌合成色氨酸的代谢网络 | 第85-86页 |
| ·大肠杆菌色氨酸合成代谢胞内代谢物浓度的测定 | 第86-89页 |
| ·大肠杆菌色氨酸合成代谢胞外代谢物浓度的测定 | 第89-90页 |
| ·大肠杆菌色氨酸合成途径的代谢流量分布 | 第90-92页 |
| ·大肠杆菌色氨酸合成代谢网络的流量分析 | 第92-93页 |
| ·本章小结 | 第93-95页 |
| ·附录：代谢产物的缩写及化学计量关系式 | 第95-99页 |
| 结论与展望 | 第99-102页 |
| 结论 | 第99-101页 |
| 展望 | 第101-102页 |
| 论文创新点 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-110页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第110页 |
