| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 插图和附表清单 | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 绵羊肺腺瘤概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 绵羊肺腺瘤的临床及组织病理学变化 | 第12-13页 |
| 1.1.2 绵羊肺腺瘤的病原学 | 第13-14页 |
| 1.1.3 绵羊肺腺瘤的发病机理 | 第14页 |
| 1.1.4 绵羊肺腺瘤的诊断与防治 | 第14-15页 |
| 1.2 JSRV概述 | 第15-16页 |
| 1.2.1 JSRV基因结构特征 | 第15页 |
| 1.2.2 JSRV基因编码的蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2.3 内、外源性绵羊肺腺瘤病毒 | 第16页 |
| 1.3 JSRV受体hyal-2的研究 | 第16页 |
| 1.4 JSRV检测方法的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.4.1 聚合酶链式反应检测JSRV | 第17-19页 |
| 1.4.2 核酸探针技术检测JSRV | 第19-20页 |
| 1.4.3 双抗体夹心ELISA法检测JSRV | 第20页 |
| 1.4.4 环介导等温扩增技术检测JSRV | 第20页 |
| 1.4.5 动物回归试验检测JSRV | 第20-21页 |
| 1.5 原核表达系统概述 | 第21-23页 |
| 1.5.1 原核表达系统的组成 | 第21页 |
| 1.5.2 原核表达的影响因素 | 第21-22页 |
| 1.5.3 外源基因在大肠杆菌中的表达形式 | 第22-23页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 2 试验一 JSRV受体hyal-2原核表达重组质粒的构建 | 第25-36页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂及药品 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 引物设计及合成 | 第26页 |
| 2.2.2 hyal-2基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.3 pGEX-4T-1-hyal-2重组质粒的构建及鉴定 | 第27-30页 |
| 2.2.4 重组质粒的菌液PCR鉴定及其序列测定 | 第30页 |
| 2.2.5 重组质粒转化至表达菌BL21(DE3) | 第30页 |
| 2.2.6 pGEX-4T-1-hyal-2重组质粒的双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-34页 |
| 2.3.1 hyal-2目的基因的扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.2 菌液PCR检测结果 | 第32页 |
| 2.3.3 hyal-2基因的序列分析 | 第32-34页 |
| 2.3.4 pGEX-4T-1-hyal-2重组质粒双酶切鉴定结果 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 2.4.1 关于目的基因的获得 | 第34-35页 |
| 2.4.2 关于表达载体的选择 | 第35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 3 试验二 JSRV受体hyal-2在大肠杆菌BL21(DE3)中的诱导表达 | 第36-45页 |
| 3.1 材料 | 第36页 |
| 3.1.1 菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂与药品 | 第36页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 3.2 方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 重组菌的诱导及表达 | 第36-38页 |
| 3.2.2 Western blotting检测融合蛋白的表达 | 第38页 |
| 3.2.3 重组菌诱导条件的优化 | 第38-39页 |
| 3.2.4 Western blotting验证低温条件下融合蛋白的表达 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-43页 |
| 3.3.1 重组菌的蛋白表达情况 | 第39-40页 |
| 3.3.2 Western blotting验证融合蛋白的表达 | 第40页 |
| 3.3.3 不同诱导条件下目的蛋白的表达情况 | 第40-42页 |
| 3.3.4 Western blotting检测低温条件下目的蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.4.1 关于hyal-2基因在大肠杆菌中的表达 | 第43页 |
| 3.4.2 关于表达Hyal-2目的蛋白诱导条件的优化 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 4 试验三 JSRV受体Hyal-2蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备 | 第45-53页 |
| 4.1 材料 | 第45页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第45页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第45页 |
| 4.2 方法 | 第45-48页 |
| 4.2.1 目的蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 4.2.2 SDS-PAGE电泳鉴定纯化产物 | 第46页 |
| 4.2.3 纯化后蛋白的Western blotting检测 | 第46页 |
| 4.2.4 蛋白浓度的测定 | 第46-47页 |
| 4.2.5 JSRV受体Hyal-2蛋白多克隆抗体的制备 | 第47-48页 |
| 4.2.6 多克隆抗体的鉴定 | 第48页 |
| 4.3 结果 | 第48-52页 |
| 4.3.1 纯化后目的蛋白的SDS-PAGE检测结果 | 第48-49页 |
| 4.3.2 纯化后蛋白的Western blotting鉴定结果 | 第49页 |
| 4.3.3 蛋白浓度的测定结果 | 第49-50页 |
| 4.3.4 琼扩实验结果 | 第50-51页 |
| 4.3.5 抗血清的Western blotting鉴定结果 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52页 |
| 4.4.1 关于Hyal-2融合蛋白的纯化 | 第52页 |
| 4.4.2 关于Hyal-2蛋白多克隆抗体的制备 | 第52页 |
| 4.5 小结 | 第52-53页 |
| 5 全文结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
