| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-22页 |
| 1.1 NAC转录因子的发现与分类 | 第14-15页 |
| 1.2 NAC转录因子的结构特点 | 第15-16页 |
| 1.3 NAC转录因子的生物学功能 | 第16-19页 |
| 1.3.1 在植物生长发育方面的作用 | 第16-17页 |
| 1.3.2 在胁迫应答中的作用 | 第17-19页 |
| 1.4 温度胁迫对植物的影响 | 第19-20页 |
| 1.4.1 高温胁迫 | 第19页 |
| 1.4.2 低温胁迫 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的及其意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-42页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.2 cDNA第一条链的合成 | 第23-24页 |
| 2.2.3 番茄LeNLP4转录因子的克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.4 构建真核表达载体及转化番茄 | 第25-30页 |
| 2.2.4.1 回收 | 第25页 |
| 2.2.4.2 连接 | 第25-26页 |
| 2.2.4.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.2.4.4 转化及克隆筛选 | 第26页 |
| 2.2.4.5 质粒DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.4.6 酶切质粒DNA | 第27页 |
| 2.2.4.7 正、反义表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.4.8 根癌农杆菌EHA105感受态细胞的制备与转化 | 第28-29页 |
| 2.2.4.9 农杆菌介导转化番茄 | 第29-30页 |
| 2.2.4.10 农杆菌介导转化烟草 | 第30页 |
| 2.2.5 实时定量荧光PCR | 第30-31页 |
| 2.2.6 LeNLP4转录因子的定位 | 第31页 |
| 2.2.6.1 pBI122-LeNLP4-GFP表达载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.6.2 pBI122-LeNLP4-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第31页 |
| 2.2.7 LeNLP4转录因子的原核表达及Western杂交 | 第31-36页 |
| 2.2.7.1 原核表达载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.7.2 E.coli BL21原核表达 | 第31-32页 |
| 2.2.7.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.7.4 原核表达蛋白的纯化 | 第33页 |
| 2.2.7.5 抗体的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.7.6 抗血清效价的测定 | 第34页 |
| 2.2.7.7 Western杂交 | 第34-36页 |
| 2.2.8 转基因植株的检测 | 第36-38页 |
| 2.2.8.1 基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.8.2 PCR检测 | 第37页 |
| 2.2.8.3 qRT-PCR分析 | 第37-38页 |
| 2.2.8.4 Western杂交分析 | 第38页 |
| 2.2.9 转基因番茄生理指标的测定 | 第38-42页 |
| 2.2.9.1 电解质外渗量测定、膜脂过氧化程度分析 | 第38页 |
| 2.2.9.2 DAB与NBT染色分析 | 第38页 |
| 2.2.9.3 H_2O_2和O_2~(·-)的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.9.4 SOD酶活性测定 | 第39页 |
| 2.2.9.5 APX酶活性测定 | 第39-40页 |
| 2.2.9.6 POD酶活性测定 | 第40页 |
| 2.2.9.7 叶绿素荧光参数测定 | 第40页 |
| 2.2.9.8 叶绿素含量的测定 | 第40页 |
| 2.2.9.9 温度处理植株生长量测定 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-63页 |
| 3.1 LeNLP4转录因子的分离及其特征 | 第42-44页 |
| 3.1.1 LeNLP4转录因子全长cDNA序列的克隆 | 第42页 |
| 3.1.2 LeNLP4转录因子全长cDNA序列及蛋白序列分析 | 第42-44页 |
| 3.2 LeNLP4蛋白的定位 | 第44-45页 |
| 3.3 正、反义表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.4 LeNLP4蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第46-47页 |
| 3.4.1 原核表达载体pET-LeNLP4的构建 | 第46-47页 |
| 3.4.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第47页 |
| 3.5 LeNLP4转录因子在番茄中的表达分析 | 第47-49页 |
| 3.5.1 LeNLP4转录因子在番茄中不同部位的表达 | 第47-48页 |
| 3.5.2 LeNLP4转录因子在激素处理下的表达分析 | 第48-49页 |
| 3.5.3 LeNLP4转录因子在逆境胁迫下的表达分析 | 第49页 |
| 3.6 LeNLP4转录因子在番茄中的遗传转化 | 第49-52页 |
| 3.6.1 转基因番茄植株的PCR鉴定 | 第49-51页 |
| 3.6.2 转基因番茄植株的qRT-PCR鉴定 | 第51页 |
| 3.6.3 转基因番茄植株的Western杂交鉴定 | 第51-52页 |
| 3.7 LeNLP4转录因子在烟草中的遗传转化的 | 第52-53页 |
| 3.7.1 转基因烟草植株的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 3.7.2 转基因烟草植株的qRT-PCR鉴定 | 第53页 |
| 3.8 LeNLP4转录因子过表达提高了番茄植株的耐冷性 | 第53-57页 |
| 3.8.1 LeNLP4过表达提高了低温胁迫下番茄幼苗的生长量 | 第53-54页 |
| 3.8.2 低温胁迫下番茄成苗的生长情况 | 第54-55页 |
| 3.8.3 LeNLP4转录因子过表达减轻低温胁迫下PSⅡ的光抑制 | 第55页 |
| 3.8.4 LeNLP4转录因子过表达提高对膜脂的保护作用 | 第55-56页 |
| 3.8.5 LeNLP4转录因子过表达提高了抗氧化能力 | 第56页 |
| 3.8.6 SOD、APX活性变化 | 第56-57页 |
| 3.8.7 LeNLP4通过上调CBF1的表达提高番茄的耐冷性 | 第57页 |
| 3.9 LeNLP4转录因子过表达促进番茄植株根系生长 | 第57-59页 |
| 3.9.1 LeNLP4转录因子过表达促进番茄幼苗植株根系生长 | 第57-58页 |
| 3.9.2 LeNLP4转录因子过表达促进番茄植株成苗侧根的形成 | 第58-59页 |
| 3.10 LeNLP4转录因子过表达提高了烟草植株的抗高温能力 | 第59-63页 |
| 3.10.1 转基因烟草对高温胁迫敏感性降低 | 第59-60页 |
| 3.10.2 LeNLP4转录因子过表达减轻高温胁迫下PSⅡ的光抑制 | 第60页 |
| 3.10.3 LeNLP4转录因子过表达提高对膜脂的保护作用 | 第60-61页 |
| 3.10.4 LeNLP4转录因子过表达提高了抗氧化能力 | 第61页 |
| 3.10.5 POD、APX活性变化 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 4.1 LeNLP4转录因子编码一个NAC转录因子 | 第63页 |
| 4.2 LeNLP4转录因子的表达调控 | 第63页 |
| 4.3 LeNLP4转录因子过表达提高了番茄植株的抗低温能力 | 第63-64页 |
| 4.4 LeNLP4转录因子过表达提高了烟草植株的抗高温能力 | 第64-65页 |
| 4.5 LeNLP4转录因子过表达促进番茄植株根系生长 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第74页 |
