| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 植物激素乙烯 | 第11-18页 |
| 1.1.1 乙烯的感知和乙烯信号 | 第12-13页 |
| 1.1.2 乙烯的不同响应 | 第13-14页 |
| 1.1.3 乙烯与发育 | 第14-15页 |
| 1.1.4 乙烯与植物免疫 | 第15-18页 |
| 1.1.4.1 植物防御信号中的激素 | 第16页 |
| 1.1.4.2 防御信号途径中乙烯介导的信号交叉 | 第16-18页 |
| 1.2 植物EIN3转录因子 | 第18-23页 |
| 1.2.1 植物中EIN3转录因子的结构特征 | 第18-20页 |
| 1.2.2 植物中EIN3转录因子的功能 | 第20页 |
| 1.2.3 植物中EIN3转录因子的生物化学调控 | 第20-22页 |
| 1.2.4 植物中EIN3转录因子响应的乙烯信号 | 第22-23页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料和方法 | 第24-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 植物材料的培养及处理 | 第24页 |
| 2.1.3 菌株及载体 | 第24页 |
| 2.1.4 试剂盒、生化试剂、酶、培养基 | 第24-26页 |
| 2.1.5 仪器与设备 | 第26页 |
| 2.1.6 PCR引物 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取与检测 | 第27-30页 |
| 2.2.1.1 Trizol法提取植物RNA | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 CTAB法提取植物总RNA | 第28-29页 |
| 2.2.1.3 总RNA含量与纯度检测 | 第29页 |
| 2.2.1.4 植物RNA的纯化(除DNA)方法 | 第29页 |
| 2.2.1.5 反转录cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.1.6 反转录产物质量检测 | 第30页 |
| 2.2.2 植物基因组DNA的提取与纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.2.1 植物基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2.2 植物基因组DNA的纯化 | 第31页 |
| 2.2.2.3 基因组DNA含量与纯度检测 | 第31页 |
| 2.2.3 基因克隆 | 第31-33页 |
| 2.2.3.1 PCR扩增体系 | 第31-32页 |
| 2.2.3.2 MdEIL1基因全长的扩增 | 第32页 |
| 2.2.3.3 目的片段回收 | 第32-33页 |
| 2.2.3.4 连接反应 | 第33页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第33-34页 |
| 2.2.4.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第34页 |
| 2.2.5 根癌农杆菌LBA4404和GV3101感受态细胞的制备和转化 | 第34-35页 |
| 2.2.5.1 根癌农杆菌LBA4404和GV3101感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.5.2 电击法转化农杆菌 | 第35页 |
| 2.2.6 质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.7 质粒DNA的酶切 | 第36页 |
| 2.2.8 载体构建 | 第36-37页 |
| 2.2.8.1 MdEIL1基因正义表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.8.2 MdEILl基因原核表达载体的构建 | 第37页 |
| 2.3 转基因材料的获得与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.1 农杆菌介导的拟南芥转化——花序侵染法(沾花法)(Clough,1998) | 第37页 |
| 2.3.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.3 转基因植株的生物学鉴定 | 第38页 |
| 2.3.3.1 转基因植株的基因组DNA鉴定 | 第38页 |
| 2.3.3.2 转基因株系的基因表达分析 | 第38页 |
| 2.3.4 拟南芥下胚轴及根长的测定 | 第38页 |
| 2.4 蛋白技术 | 第38-43页 |
| 2.4.1 原核表达蛋白 | 第38-39页 |
| 2.4.2 蛋白破碎检测 | 第39页 |
| 2.4.3 蛋白的变性复性 | 第39页 |
| 2.4.4 透析袋的处理 | 第39页 |
| 2.4.5 试剂配制 | 第39页 |
| 2.4.6 蛋白变性复性 | 第39-40页 |
| 2.4.7 考马斯亮蓝染色 | 第40页 |
| 2.4.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第40-41页 |
| 2.4.9 转膜 | 第41页 |
| 2.4.10 Western Blot | 第41页 |
| 2.4.11 植物总蛋白的提取 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-52页 |
| 3.1 苹果EIN3-like类基因的序列分析 | 第43-45页 |
| 3.1.1 苹果EIN3-like类基因的进化树分析 | 第43-44页 |
| 3.1.2 苹果基因的氨基酸序列分析 | 第44-45页 |
| 3.2 苹果乙烯响应转录因子的表达分析 | 第45-47页 |
| 3.2.1 MdEIL1及其同源基因的时空表达 | 第45页 |
| 3.2.2 MdEIL1及其同源基因在不同激素处理中的表达分析 | 第45-47页 |
| 3.2.2.1 MdEIL1及其同源基因在ACC处理中的表达分析 | 第45-46页 |
| 3.2.2.2 MdEIL1及其同源基因在其他激素处理中的表达分析 | 第46-47页 |
| 3.3 苹果乙烯响应转录因子MdEIL1全长cDNA的分子克隆 | 第47-48页 |
| 3.4 苹果乙烯响应转录因子MdEIL1的原核诱导 | 第48-49页 |
| 3.4.1 MdEIL1原核诱导载体的构建 | 第48页 |
| 3.4.2 MdEIL1原核表达结果 | 第48-49页 |
| 3.5 过量表达苹果乙烯响应转录因子MdEIL1能增强转基因拟南芥的乙烯响应 | 第49-52页 |
| 3.5.1 转基因拟南芥的获得与鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5.2 转基因拟南芥的下胚轴测量 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第64页 |
