| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 植物的抗病性及其分子机制 | 第13-14页 |
| 1.2 泛素/26S蛋白酶体系统 | 第14-17页 |
| 1.2.1 泛素(Ubiquitin,Ub) | 第14-15页 |
| 1.2.2 泛素/26S蛋白酶体系统介导的反应机制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 泛素连接酶E3 | 第16-17页 |
| 1.3 泛素连接酶E3在植物生长发育中的作用 | 第17-18页 |
| 1.4 泛素连接酶E3介导的植物抗病反应 | 第18-20页 |
| 1.4.1 U-box类型泛素连接酶参与的植物抗病反应 | 第18-19页 |
| 1.4.2 RING-finger类型泛素连接酶参与的植物抗病反应 | 第19-20页 |
| 1.4.3 SCF复合体类型泛素连接酶参与的植物抗病反应 | 第20页 |
| 1.5 本实验的目的意义 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 植物材料和病菌 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 引物 | 第22-23页 |
| 2.2 主要试剂的配置 | 第23-24页 |
| 2.2.1 相关溶液试剂的配置 | 第23页 |
| 2.2.2 部分相关培养基的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 YEP培养基 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 LB培养基 | 第24页 |
| 2.2.2.3 YM培养基 | 第24页 |
| 2.2.2.4 MS培养基 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-41页 |
| 2.3.1 番茄的种植与处理 | 第24-25页 |
| 2.3.2 植物总RNA提取 | 第25-27页 |
| 2.3.2.1 Trizol法提取植物总RNA | 第25页 |
| 2.3.2.2 RNA中基因组DNA的去除 | 第25-26页 |
| 2.3.2.3 检测RNA的提取质量 | 第26-27页 |
| 2.3.2.3.1 紫外分光光度计 | 第26页 |
| 2.3.2.3.2 琼脂糖变性凝胶电泳 | 第26-27页 |
| 2.3.3 3’RACE方法扩增目的基因 | 第27-28页 |
| 2.3.3.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.3.3.2 反转录反应 | 第27页 |
| 2.3.3.3 套式PCR | 第27-28页 |
| 2.3.4 CTAB法提取植物DNA | 第28-29页 |
| 2.3.5 小量法提取植物DNA | 第29页 |
| 2.3.6 目的片段的回收(胶回收试剂盒法) | 第29-30页 |
| 2.3.7 目的片段与克隆载体的连接 | 第30页 |
| 2.3.8 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第30-32页 |
| 2.3.8.1 普通法感受态细胞制备 | 第30页 |
| 2.3.8.2 质粒DNA向大肠杆菌中转化(热激法) | 第30-31页 |
| 2.3.8.3 菌种的保存 | 第31页 |
| 2.3.8.4 大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法 | 第31-32页 |
| 2.3.8.5 电击杯的处理方法 | 第32页 |
| 2.3.9 大肠杆菌质粒DNA小量提取和酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.9.1 质粒小提试剂盒提取质粒DNA | 第32-33页 |
| 2.3.9.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| 2.3.10 S1BAH1融合蛋白的原核表达 | 第33-37页 |
| 2.3.10.1 原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.10.2 蛋白的诱导表达及纯化 | 第34页 |
| 2.3.10.3 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第34-35页 |
| 2.3.10.3.1 凝胶的制备 | 第34-35页 |
| 2.3.10.3.2 电泳步骤 | 第35页 |
| 2.3.10.4 融合蛋白纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.10.5 体外E3泛素连接酶活性反应 | 第36页 |
| 2.3.10.6 Western blot | 第36-37页 |
| 2.3.11 基因瞬时表达 | 第37-39页 |
| 2.3.11.1 洋葱表皮瞬时表达载体的制备 | 第37-38页 |
| 2.3.11.2 基因枪微弹载体的制备 | 第38页 |
| 2.3.11.3 基因枪转化 | 第38-39页 |
| 2.3.12 VIGS载体构建 | 第39-40页 |
| 2.3.13 VIGS体系建立与验证 | 第40页 |
| 2.3.14 Botrytis cinerea抗性鉴定 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-51页 |
| 3.1 番茄SlBAH1全长基因的克隆及分析 | 第41-42页 |
| 3.1.1 番茄SlBAH1全长基因的克隆 | 第41页 |
| 3.1.2 SlBAH1基因的cDNA全长序列分析 | 第41-42页 |
| 3.2 原核表达的融合蛋白体外E3泛素连接酶活性分析 | 第42-44页 |
| 3.3 SLBAH1亚细胞定位分析 | 第44-46页 |
| 3.4 生物胁迫与防卫信号分子处理下SlBAH1的表达模式 | 第46-48页 |
| 3.5 SlBAH1沉默植株的灰霉病菌的抗性检测 | 第48-51页 |
| 3.5.1 VIGS载体构建 | 第48-49页 |
| 3.5.2 PCR检测 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表的主要学术论文 | 第61页 |
