摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第12-20页 |
1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒及其病原的研究进展 | 第12-18页 |
1.1.1 PRRSV 的分类 | 第12页 |
1.1.2 PRRSV 的遗传变异性 | 第12-13页 |
1.1.3 PRRSV 的传播 | 第13页 |
1.1.4 PRRSV 的复制 | 第13-14页 |
1.1.5 PRRSV 的非结构蛋白 | 第14-15页 |
1.1.6 PRRSV 的结构蛋白 | 第15-16页 |
1.1.7 PRRSV 的致病机制 | 第16-17页 |
1.1.8 PRRS 的临床症状 | 第17页 |
1.1.9 PRRS 的疫苗防控 | 第17-18页 |
1.2 血红素加氧酶 1 的研究进展 | 第18-19页 |
1.2.1 血红素加氧酶 1 介绍 | 第18页 |
1.2.2 HO-1 在病原感染过程中的作用的研究进展 | 第18-19页 |
1.3 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
第二章 PRRSV感染对 MARC145 及 PK-15CD163中血红素加氧酶 1表达的影响 | 第20-29页 |
2.1 材料 | 第20-22页 |
2.1.1 细胞、PRRSV 毒株及抗体 | 第20页 |
2.1.2 主要设备和仪器 | 第20页 |
2.1.3 实验用主要试剂 | 第20页 |
2.1.4 细胞用试剂及其配制 | 第20-21页 |
2.1.5 分子实验用主要试剂及其配制 | 第21-22页 |
2.2 实验方法 | 第22-26页 |
2.2.1 Marc145 及 PK-15CD163细胞的复苏与传代培养 | 第22页 |
2.2.2 PRRS 病毒的增殖与纯化 | 第22页 |
2.2.3 细胞样品总 RNA 的提取 | 第22-23页 |
2.2.4 实时荧光定量 PCR 反转录(Real time RT-PCR)的方法与步骤 | 第23页 |
2.2.5 Real time PCR 检测引物及检测方法 | 第23-24页 |
2.2.6 Western blot 检测蛋白表达水平 | 第24-26页 |
2.2.7 PRRSV 感染对 Marc145 细胞中 HO-1 表达的影响 | 第26页 |
2.2.8 PRRSV 感染对 PK-15CD163细胞中 HO-1 表达的影响 | 第26页 |
2.3 实验结果 | 第26-28页 |
2.4 分析及讨论 | 第28-29页 |
第三章 诱导 HO-1 表达对 PRRSV感染对 MARC145及 PK-15CD163的影响 | 第29-42页 |
3.1 材料 | 第29-31页 |
3.1.1 细胞、PRRSV 毒株及抗体 | 第29页 |
3.1.2 主要设备和仪器 | 第29页 |
3.1.3 实验用主要试剂 | 第29页 |
3.1.4 细胞用主要试剂及其配制 | 第29-30页 |
3.1.5 分子实验用主要试剂及其配制 | 第30-31页 |
3.2 实验方法 | 第31-34页 |
3.2.1 CoPP 最佳作用条件的确定 | 第31页 |
3.2.2 CoPP 对 Marc145 及 PK-15CD163细胞活性的影响 | 第31页 |
3.2.3 CoPP 对 Marc145 及 PK-15CD163细胞中 HO-1 的表达的影响 | 第31-32页 |
3.2.4 CoPP 诱导 HO-1 表达对 PRRSV 感染 Marc145 及 PK-15CD163细胞的影响 | 第32页 |
3.2.5 CoPP 诱导 HO-1 表达对不同 PRRSV 毒株感染 Marc145 细胞的影响 | 第32-33页 |
3.2.6 细胞培养上清子代病毒滴度(TCID50)测定 | 第33页 |
3.2.7 CoPP 诱导 HO-1 表达对 PRRSV/SD16/GFP 及 PRRSV/CH1a/DsRed 感染Marc145 细胞的影响 | 第33-34页 |
3.3 实验结果 | 第34-41页 |
3.3.1 HO-1 特异性诱导剂 CoPP 的作用条件的确定 | 第34-35页 |
3.3.2 CoPP 对 Marc145 及 PK-15CD163细胞的毒性作用检测 | 第35-36页 |
3.3.3 CoPP 浓度梯度依赖性诱导 Marc145 及 PK-15CD163细胞中 HO-1 的表达 | 第36-37页 |
3.3.4 CoPP 诱导 HO-1 表达抑制 PRRSV 对易感细胞系的感染 | 第37-39页 |
3.3.5 CoPP 诱导 HO-1 上调表达显著抑制不同毒株的 PRRSV 对 Marc145 细胞的感染 | 第39-41页 |
3.4 分析及讨论 | 第41-42页 |
第四章 过表达 HO-1 对 PRRSV感染 MARC145 及 PK-15CD163细胞的影响 | 第42-47页 |
4.1 材料 | 第42-43页 |
4.1.1 细胞、PRRSV 毒株及抗体 | 第42页 |
4.1.2 主要设备和仪器 | 第42页 |
4.1.3 细胞用试剂及其配制 | 第42-43页 |
4.1.4 分子实验用主要试剂及其配制 | 第43页 |
4.2 实验方法 | 第43-44页 |
4.2.1 腺病毒过表达 HO-1 的条件的选择 | 第43页 |
4.2.2 腺病毒过表达 HO-1 对 PRRSV 感染 Marc145 细胞的影响 | 第43-44页 |
4.2.3 腺病毒过表达 HO-1 对 PRRSV 感染 PK-15CD163细胞的影响 | 第44页 |
4.3 实验结果 | 第44-46页 |
4.3.1 腺病毒感染条件的优化 | 第44-45页 |
4.3.2 过表达 HO-1 抑制 PRRSV 对 Marc145 细胞的感染 | 第45-46页 |
4.3.3 过表达 HO-1 抑制 PRRSV 对 PK-15CD163细胞的感染 | 第46页 |
4.4 分析及讨论 | 第46-47页 |
第五章 敲低 HO-1 表达对 PRRSV感染 PK-15CD163细胞的影响 | 第47-55页 |
5.1 材料 | 第47-48页 |
5.1.1 细胞、PRRSV 毒株及抗体 | 第47页 |
5.1.2 主要设备和仪器 | 第47页 |
5.1.3 细胞用试剂及其配制 | 第47-48页 |
5.1.4 分子实验用主要试剂及其配制 | 第48页 |
5.2 实验方法 | 第48-50页 |
5.2.1 敲低基础水平 HO-1 表达对 PRRSV 感染 PK-15CD163细胞的影响 | 第48-49页 |
5.2.2 siRNA 敲低 HO-1 表达对 CoPP 诱导 HO-1 表达抑制 PRRSV 感染 PK-15CD163的影响 | 第49-50页 |
5.2.3 siRNA 敲低 HO-1 表达对腺病毒过表达 HO-1 抑制 PRRSV 感染 PK-15CD163细胞的影响 | 第50页 |
5.3 实验结果 | 第50-54页 |
5.3.1 siRNA 敲低正常 PK-15CD163细胞 HO-1 表达促进 PRRSV 对 PK-15CD163细胞的感染 | 第50-52页 |
5.3.2 敲低 HO-1 表达部分逆转了 HO-1 对 PRRSV 感染的抑制作用 | 第52-54页 |
5.4 分析及讨论 | 第54-55页 |
结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-66页 |
缩略词 | 第66-67页 |
致谢 | 第67-68页 |
作者简介 | 第68页 |